[發明專利]一種檢測BRAF基因突變的引物探針組合物、試劑盒及其使用方法和應用

在審

• 申請號: 202210426209.9
• 申請日: 2022-04-21
• 公開（公告）號: CN114634987A
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發明（設計）人: 鄧微;蘭玲;茍默;周美岑;魏星
• 申請（專利權）人: 北京積水潭醫院;北京華諾奧美基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 錢學宇

1.一種檢測BRAF基因突變的引物探針組合物，其特征在于，所述引物探針組合物包括檢測BRAF基因突變位點c.1919A＞C的實時熒光PCR引物和檢測探針；

所述實時熒光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的氨基酸序列；

所述檢測探針包括SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述檢測BRAF基因突變的引物探針組合物，其特征在于，所述探針為Taqman探針，所述Taqman探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團；

所述熒光報告基團包括FAM、Cy5、ROX、VIC和NED中的任一種；所述熒光淬滅基團包括MGB、NFQ、QSY、MGB和BHQ1中的任一種。

3.根據權利要求2所述檢測BRAF基因突變的引物探針組合物，其特征在于，所述熒光報告基團為VIC；所述熒光淬滅基團為MGB。

4.一種檢測BRAF基因突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1～3任一項所述的引物探針組合物。

5.根據權利要求4所述的檢測BRAF基因突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括針對人類CFTR基因保守序列特異性的內參引物和內參探針；

所述內參引物包括SEQ ID No.4～5所示的的核苷酸序列；所述內參探針包括SEQ IDNo.6所示的的核苷酸序列。

6.根據權利要求5所述的檢測BRAF基因突變的試劑盒，其特征在于，所述內參探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團；

所述內參探針的熒光報告基團與所述檢測探針的熒光報告基團不同；

優選地，所述內參探針的熒光報告基團為NED，所述內參探針的熒光淬滅基團為MGB。

7.一種根據權利要求4～6任一項所述的試劑盒以非疾病診斷和/或治療為目的的使用方法，其特征在于，其包括：

提取待測樣本的基因組，使用所述試劑盒對所述待測樣本的基因組進行擴增，檢測熒光信號，將熒光信號的閾值限設置為0.15，分析Ct值。

8.根據權利要求7所述的使用方法，其特征在于，所述擴增的程序包括：

預變性：95℃、30sec，1個循環；

循環擴增：95℃、10sec，60℃、30sec；

所述循環擴增的次數為45次。

9.一種根據權利要求4～6任一項所述的試劑盒在制備BRAF基因突變相關的癌癥診斷試劑中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述癌癥包括甲狀腺乳頭狀癌、結直腸癌和黑色素瘤。