[發(fā)明專利]一種鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)基及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210423291.X
• 申請日: 2022-04-21
• 公開（公告）號: CN114774361A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張孝文;汪珂;徐梅茜;宋麗娟
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（廣州呼吸中心）
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 佛山市神機(jī)營專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44765
• 代理人: 許尤慶

1.一種鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)基，由如下組分組成：Human R-spondin1、Human Noggin、Human Wnt3a、Nicotinamide、N-acetylysteine、Gastin I、Human EGF、Human FGF 10、Human FGF basic、Hydrocortisone、Prostaglandin E2、SB202190、Y-27632Dihydrochloride、B27、A83-01、Insulin-Transferrin-Selenium、L-Glutmax、Triiodothyronine、HEPES。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)基，其中各組分濃度如下：Human R-spondin 1 10-20ng/ml、Human Noggin 5-15ng/ml、Human Wnt3a 15-40ng/ml、Nicotinamide 5-10mmol//L、N-acetylysteine 1-1.25mmol//L、Gastin I 2-10mmol//L、Human EGF 10-55ng/ml、Human FGF 1010-20ng/ml、Human FGF basic 5-10ng/ml、Hydrocortisone 100-175ng/ml、Prostaglandin E2 1-2μmol//L、SB202190 10-20ng/ml、Y-27632 Dihydrochloride 100-500nmol//L、B27 0.5-1X、A83-01 100-200nM、Insulin-Transferrin-Selenium 0.5-1X、L-Glutmax 0.5-1X、Triiodothyronine 100-500nmol//L、HEPES5-10mmol//L。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)基，其中各組分在培養(yǎng)基中的濃度如下：

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)基在培養(yǎng)腔鼻竇腺樣囊性癌來源細(xì)胞中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)腔鼻竇腺樣囊性癌來源細(xì)胞的方法，所述方法包括：

(1)獲取腔鼻竇腺樣囊性癌細(xì)胞；

(2)將獲取的細(xì)胞接種至所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的方法，每隔14天更換一次所述培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其中所述獲取腔鼻竇腺樣囊性癌細(xì)胞的步驟如下：

(1)獲取鼻腔鼻竇腺樣囊性癌組織；

(2)將鼻腔鼻竇腺樣囊性癌組織進(jìn)行破碎形成組織小塊；

(3)對所述組織小塊的組織粘液進(jìn)行溶解獲得干凈的組織小塊；

(4)對所述干凈的組織小塊進(jìn)行組織消化，形成消化后的組織；

(5)對消化后的組織進(jìn)行中止消化；

(6)對中止消化的組織進(jìn)行離心，獲取組織沉淀，對所述組織沉淀進(jìn)行過濾后再離心，去除上清，加入裂解液裂解后再終止裂解，對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)后，再離心得到腺樣囊性癌細(xì)胞沉淀；

(7)根據(jù)總細(xì)胞量加入基質(zhì)膠以及細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果加入Advanced DMEM/F12培養(yǎng)基，吹散混勻形成含有數(shù)個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)。

8.一種根據(jù)權(quán)利要求5-7所述的方法培養(yǎng)的細(xì)胞。

9.一種根據(jù)權(quán)利要求8中的細(xì)胞制備的鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官。

10.根據(jù)權(quán)利要求9中的鼻腔鼻竇腺樣囊性癌類器官在藥物篩選中的應(yīng)用。