[發明專利]擴增HIV-1 RRE全長序列的引物組合物及其應用

在審

• 申請號: 202210421097.8
• 申請日: 2022-04-21
• 公開（公告）號: CN115287372A
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 李林;韓婧婉;施玉婷;朱博;李韓平;劉永健;賈磊;王曉林;李敬云;李天一
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

本發明公開了擴增HIV?1RRE全長序列的引物組合物及其應用。本發明提供的引物組合物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA組成；所述引物組合物的功能為如下(a)或(b)：(a)擴增人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV?1)RRE全長序列；(b)輔助鑒定人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV?1)。本發明對于HIV?1RRE全長序列的擴增及鑒定、HIV?1的檢測鑒定及HIV?1致病機制的研究和新藥物靶點的發現具有潛在的應用前景，同時對于我國艾滋病防控工作具有一定價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種擴增HIV-1 RRE全長序列的引物組合物及其應用。

背景技術

HIV-1具有高度的變異性，我國已經發現了HIV-1的A、B/B`、C、D、F等亞型 毒株，以及CRF01-AE、CRF02-AG、CRF07-BC、CRF08-BC、CRF15-01B等基因重 組型毒株，是HIV-1流行亞型組成最復雜的國家之一，其中，主要流行的毒株四種， 分別是CRF07_BC(41％)、CRF01_AE(33％)、CRF08_BC(11％)和CN.B’(4％) 亞型，這四種毒株的感染者占我國HIV-1感染者總數的89％。

RRE(Rev Response Element)，即Rev反應元件是位于未經剪輯的病毒mRNA第 二內含子上的一段RNA序列，全長352nt且高度結構化，可與HIV-1重要的調節蛋 白Rev結合，幫助病毒mRNA轉運出核進行表達，在病毒復制過程中發揮重要作用。 設計出保守的、適用于我國HIV-1流行毒株擴增的HIV-1-RRE引物對是研發HIV-1 RRE全長序列擴增方法的關鍵，這也將為研究HIV-1的致病機制及發現新的藥物靶點 提供參考。

發明內容

本發明的一個目的是提供引物對。

本發明提供的引物對，由引物1和引物2組成；

所述引物1的核苷酸序列為序列表的序列1或將序列1至少一個經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得的與原序列功能相同的序列；

所述引物2的核苷酸序列為序列表的序列2或將序列2至少一個經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得的與原序列功能相同的序列。

上述引物對，所述引物1和所述引物2的摩爾比為1：1。

用于鑒定或輔助鑒定人免疫缺陷病毒Ⅰ型的PCR試劑也是本發明保護的范圍，包括PCR試劑1和PCR試劑2；

所述PCR試劑1和所述PCR試劑2均含有權利要求1所述的引物對；

所述引物對中的引物1和引物2在所述PCR試劑1中的濃度均為0.4μM；

所述引物對中的引物1和引物2在所述PCR試劑2中的濃度均為0.4μM。

上述PCR試劑1中含有PrimeScript 1 Step Enzyme Mix、2×1 Step Buffer(DyePlus)、 引物1和引物2；

或，上述PCR試劑1中含有Premix Taq(Ex Taq Version 2.0 plus dye)、引物1和引物2；

上述PCR試劑2中含有Premix Taq(Ex Taq Version 2.0 plus dye)、引物1和引物2。

上述引物對或上述試劑在制備試劑盒中的應用也是本發明保護的范圍，所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)或(c)或(d)或(e)：

(a)擴增人免疫缺陷病毒Ⅰ型RRE全長序列；

(b)鑒定或輔助鑒定人免疫缺陷病毒Ⅰ型；

(c)鑒定或輔助鑒定待檢者是否感染人免疫缺陷病毒Ⅰ型；