[發明專利]用于癌細胞原代培養的添加劑及其培養基和用途

在審

• 申請號: 202210418768.5
• 申請日: 2022-04-20
• 公開（公告）號: CN114854690A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 武瑞琴;王正遠;楊海
• 申請（專利權）人: 南寧云冪方生物醫藥技術有限責任公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 邢少真

本發明提出了一種用于癌細胞原代培養的添加劑及其培養基和用途，屬于醫療技術領域。所述用于癌細胞原代培養的添加劑，其特征在于，包括霍亂毒素、R?spondin、A?83?01和Y?27632中的至少三種。用于癌細胞原代培養的培養基包括完全DMEM培養基和F12營養混合物；所述F12營養混合物包括霍亂毒素、R?spondin、A?83?01和Y?27632中的至少三種。本發明通過優化篩選培養方法和培養基配方，研制出了一種不依賴于滋養層細胞的培養體系，成功率高，從而大大降低了培養基的大規模制備難度，同時也更易于建立穩定的質量控制體系，從而實現商業化。

技術領域

本發明涉及檢測試劑盒技術領域，具體涉及用于癌細胞原代培養的添加劑及其培養基和用途。

背景技術

原代腫瘤細胞因剛從組織中分離，生物學特性未發生很大變化，可以很好的保持原始狀態的腫瘤生物學特性。由于遺傳背景差異，不同的患者發病的機制及治療敏感性均存在個體性差異，因此，自體腫瘤細胞原代培養是研究患者腫瘤發病機制及腫瘤細胞分子生物學特性的重要手段。

人工模擬腫瘤細胞在體外的生存環境是腫瘤細胞原代培養的基礎，腫瘤細胞的生存環境除需無菌、溫度、pH值、濕度等環境因素外，最主要的是培養基，它給細胞提供生長所需的營養物質。目前細胞進行原代培養及建系最常用的是含10％的胎牛血清的基礎培養液進行培養。但是應用該腫瘤細胞培養技術培養原代腫瘤細胞，成功率非常低。這是因為含血清培養基成分不明確；而且使用血清有可能促進某些細胞的生長(如成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(如表皮細胞)，血清中含一些對細胞產生毒性的物質，影響細胞生長，甚至造成細胞死亡。在血清取材過程中還有可能帶入支原體、病毒，對細胞產生潛在影響，可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性。血清還存在批間差異較大，性能不穩定等缺點。無血清培養更利于細胞生長，而且批間次一致性高，可消除來自血清的不均一性，增加確定性，也不存在動物倫理方面的爭議。

近些年發展的一些原代腫瘤細胞無血清培養基使原代腫瘤細胞培養的成功率有所提高。但現有的無血清培養基在培養原代腫瘤細胞過程中，仍然需要在培養體系中引入異種來源的經過輻照處理的滋養層細胞，這使得培養體系的建立過于繁瑣，不方便操作，同時也對試劑盒的標準化和規?；a提出挑戰，實現量產困難較大，同時不能有效地抑制和去除原代腫瘤細胞中的主要混雜成分成纖維細胞。

發明內容

本發明的目的在于提出用于癌細胞原代培養的添加劑及其培養基和用途，通過優化篩選培養方法和培養基配方，研制出了一種可以不依賴于滋養層細胞和/或血清的培養體系，該培養體系可以實現如下目的中的一個或多個：成功率高；降低了培養基的大規模制備難度；易于建立穩定的質量控制體系，進而實現商業化。

為實現上述發明目的中的一個或多個，本發明的提供如下技術方案。

本發明提供一種用于癌細胞原代培養的添加劑，包括霍亂毒素、R-spondin(例如為R-spondin 1,R-spondin 2,R-spondin 3和R-spondin 4)、A-83-01和Y-27632中的至少三種；示例性地為霍亂毒素、R-spondin、Y-27632，質量比為1：(2-3)：(2-5)；霍亂毒素、R-spondin、A-83-01，質量比為1：(2-3)：(1-4)；霍亂毒素、A-83-01和Y-27632，質量比為1：(1-4)：(2-5)；R-spondin、A-83-01和Y-27632，質量比為1：(2-4)：(1-3)。

優選為霍亂毒素、R-spondin、Y-27632，或霍亂毒素、A-83-01和Y-27632。

作為本發明的進一步改進，包括霍亂毒素、R-spondin、A-83-01和Y-27632。

優選地，所述霍亂毒素、R-spondin、A-83-01和Y-27632的質量比為1：(2-3)：(1-4)：(2-5)。