[發(fā)明專利]一種從薔薇屬植物組織中提取總RNA的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210415469.6
• 申請(qǐng)日: 2022-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN114774406A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田雪軍;韋如健;陳士;李仔葉;吳晶晶;李昊璞;徐佩琪;徐艷;熊興鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 荊楚理工學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C40B40/06
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種從薔薇屬植物組織中提取總RNA的方法，其特征在于，所述方法包括將薔薇屬植物組織經(jīng)液氮研磨得到粉末，將所述粉末進(jìn)行三次裂解和提取后再進(jìn)行氯仿抽提和異丙醇沉淀，得到薔薇屬植物組織總RNA，所述三次裂解和提取分別采用溶液A、溶液B和溶液C進(jìn)行裂解提取，其中：

所述溶液A的溶質(zhì)由三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、氯化鉀、氯化鈉、十六烷基三甲基溴化銨、β-巰基乙醇和濕潤(rùn)劑P-40組成；

所述溶液B的溶質(zhì)由三羥甲基氨基甲烷、氯化鋰、十二烷基肌氨酸鈉、聚乙二醇8000和聚乙烯吡咯烷酮組成；

所述溶液C的溶質(zhì)由異硫氰酸胍、醋酸鈉、水飽和酚、8-羥基喹啉和β-巰基乙醇組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶液A的組成為：

0.1M三羥甲基氨基甲烷、0.05M乙二胺四乙酸、0.5M氯化鉀、1.5M氯化鈉、20g/L十六烷基三甲基溴化銨、體積分?jǐn)?shù)為4％的β-巰基乙醇和體積分?jǐn)?shù)為4％的濕潤(rùn)劑P-40，其余為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述溶液B的組成為：0.1M三羥甲基氨基甲烷、2M氯化鋰、20g/L十二烷基肌氨酸鈉、100g/L聚乙二醇8000和40g/L聚乙烯吡咯烷酮，其余為水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，所述溶液C的組成為：4M異硫氰酸胍、0.2M醋酸鈉、體積分?jǐn)?shù)為50％的水飽和酚、1g/L 8-羥基喹啉和體積分?jǐn)?shù)為2％的β-巰基乙醇，其余為水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于，所述三次裂解和提取包括如下步驟：

(1)將所述粉末與所述溶液A渦旋混勻，靜置3-5min，離心，吸取上清液；

(2)將步驟(1)得到的上清液與所述溶液B振蕩混勻，靜置3-5min，離心，吸取上清液；

(3)將步驟(2)得到的上清液與所述溶液C，振蕩混勻，靜置3-5min，完成所述三次裂解和提取。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于，所述溶液A的pH值為8.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于，所述溶液B的pH值為8.0。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于，所述溶液C的pH值為4.8。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于，所述薔薇屬植物組織包括根、莖、葉、花和/或果實(shí)。

10.權(quán)利要求1-9中任一所述的方法在薔薇屬植物基因研究和/或構(gòu)建薔薇屬植物cDNA文庫中的應(yīng)用。