[發明專利]一種棕色脂肪細胞來源的外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210413680.4
• 申請日: 2022-04-20
• 公開（公告）號: CN114517187A
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 金萬洙;葉榮財
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/12;C12N15/867;A61K35/35;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 北京鴻元知識產權代理有限公司 11327
• 代理人: 溫劍

1.一種棕色脂肪細胞來源的外泌體的制備方法，其包括以下步驟：

S1：構建共表達PPARγ和CEBPβ的人源皮膚成纖維細胞，得到棕色脂肪前體細胞；

S2：利用棕色脂肪細胞誘導分化培養基對步驟S1獲得的棕色脂肪前體細胞進行誘導分化培養，獲得棕色脂肪細胞；

S3：使步驟S2獲得的棕色脂肪細胞分泌外泌體，獲得棕色脂肪細胞來源的外泌體。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其中，步驟S1中所述構建共表達PPARγ和CEBPβ的人源皮膚成纖維細胞的操作為：

S11：分別構建表達PPARγ和CEBPβ的慢病毒表達載體，得到PPARγ慢病毒表達載體和CEBPβ慢病毒表達載體；

S12：分別對步驟S11構建獲得的PPARγ慢病毒表達載體和CEBPβ慢病毒表達載體進行慢病毒包裝，得到表達PPARγ的慢病毒和表達CEBPβ的慢病毒；

S13：使用步驟S12獲得的表達PPARγ的慢病毒和表達CEBPβ的慢病毒對人源皮膚成纖維細胞進行慢病毒感染，得到所述棕色脂肪前體細胞。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其中，步驟S1中所述PPARγ和CEBPβ的編碼序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其中，步驟S2中所述棕色脂肪細胞誘導分化培養基的配方包括：體積百分含量為97%-99%的高糖DMEM、體積百分含量為1%-3%的胎牛血清、32-34 μM的生物素、0.4-0.6 μM的胰島素、16-18 μM的泛酸、0.09-0.11 μM的DEX、1-3 μM的T3、0.50-0.60 mM的IBMX和0.02-0.04 mM的吲哚美辛。

5.根據權利要求1或2所述的制備方法，其中，步驟S2中所述誘導分化培養的時間為6天以上。

6.根據權利要求1或2所述的制備方法，其中，步驟S2中所述誘導分化培養的條件為5%CO₂，37±1℃。

7.根據權利要求1或2所述的制備方法，其中，步驟S3中所述使步驟S2獲得的棕色脂肪細胞分泌外泌體的操作為使用無血清基礎培養基對所述棕色脂肪細胞進行培養。

8.一種人源皮膚成纖維細胞轉分化的棕色脂肪細胞來源的外泌體，其由權利要求1-7中任一項所述的制備方法獲得。

9.權利要求8所述的棕色脂肪細胞來源的外泌體在制備用于治療關節炎相關病癥的藥物中的應用。

10.一種治療關節炎相關病癥的藥物，其包括權利要求8所述的棕色脂肪細胞來源的外泌體作為活性成分。

11.根據權利要求10所述的藥物，其中所述藥物為外用藥物，其劑型包括散劑、溶液、酊劑、醑劑、洗劑、軟膏、乳膏、糊劑、油劑、凝膠劑、涂膜劑、擦劑、滴劑、氣霧劑、濕敷劑、栓劑、貼劑和噴劑。

12.根據權利要求10或11所述的藥物，其中所述關節炎相關病癥包括痛風性關節炎、頸椎間盤突出、腰間盤突出、腰椎間盤病變和腱炎。