[發明專利]一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜及其建立方法和應用

在審

• 申請號: 202210411295.6
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114839301A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 閆廣利;王喜軍;孫暉;方衡;宋宏偉;楊樂;車延檸
• 申請（專利權）人: 王喜軍;車延檸
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 趙麗

1.一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜，其特征在于：由35個特征峰組成，以18號峰為參照峰，計算各特征峰與參照峰的相對保留時間，其相對保留時間應在規定值的±10％范圍之內，規定值為：0.11-峰1、0.13-峰2、0.14-峰3、0.18-峰4、0.19-峰5、0.21-峰6、0.27-峰7、0.29-峰8、0.42-峰9、0.59-峰10、0.61-峰11、0.66-峰12、0.72-峰13、0.74-峰14、0.75-峰15、0.87-峰16、0.98-峰17、1.00-峰18、1.13-峰19、1.17-峰20、1.21-峰21、1.43-峰22、1.44-峰23、1.58-峰24、1.68-峰25、1.74-峰26、1.76-峰27、1.77-峰28、1.79-峰29、1.85-峰30、1.93-峰31、2.06-峰32、2.07-峰33、2.12-峰34、2.14-峰35。

2.根據權利要求1所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜，其特征在于：峰2為次黃嘌呤，峰5為尿囊素，峰15為苦杏仁苷，峰17為毛蕊異黃酮葡萄糖苷，峰18為2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷，峰22為橙黃決明素，峰31為吉馬酮。

3.根據權利要求1所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜，其特征在于：峰7、17、19、20、21、23為黃芪特征峰，峰1、2、32為水蛭特征峰，峰24、26、27、28、29、31為莪術特征峰，峰30為三棱特征峰，峰10、14、15為桃仁特征峰，峰4、16為山楂特征峰，峰3、8為土鱉蟲特征峰，峰6、22為決明子特征峰，峰13、18、25為何首烏特征峰，峰9為新產生峰。

4.根據權利要求1所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜，其特征在于：芪蛭膠囊由以下重量份數的原料藥制成：黃芪100～400份、水蛭40～160份、桃仁75～300份、何首烏75～300份、莪術55～220份、三棱55～220份、決明子62.5～250份、山楂62.5～250份和土鱉蟲15～60份。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜的建立方法，其特征在于：包括以下步驟：

取芪蛭膠囊內容物細粉0.5-5.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入適當濃度的甲醇10-100mL，稱定重量，超聲提取10-100分鐘，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液；

芪蛭膠囊樣品的供試品溶液利用超高效液相色譜法進行成分的分離，色譜條件為：Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱(2.1×100mm，1.8μm)，流動相乙腈-0.05～0.3％磷酸水溶液，線性梯度洗脫，流速0.2～0.5mL/min，柱溫20～40℃，進樣量0.5～5μL；

流動相線性洗脫梯度為：0～3min，乙腈1→4％；3～4min，乙腈4→8％；4～7min，乙腈8→11％；7～18min，乙腈11→64％；18～22min，乙腈64→100％；22～24min，乙腈100％；

采用紫外光譜雙波長切換掃描方式進行檢測，檢測波長為：0～5min檢測波長為260nm，5～24min檢測波長為210nm；

取至少10批芪蛭膠囊樣品，分別制備供試品溶液，采集指紋圖譜，導入國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，生成對照指紋圖譜。

6.根據權利要求5所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜的建立方法，其特征在于：參照物2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷溶液的制備方法為：取2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷對照品適量，加75％甲醇制成濃度為40μg/mL的溶液。

7.根據權利要求5所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜的建立方法，其特征在于：芪蛭膠囊內容物的溶解方法為采用75％甲醇溶解。

8.根據權利要求1～4任意一項所述的一種芪蛭膠囊UPLC-UV對照指紋圖譜在芪蛭膠囊整體質量控制中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：以18號峰之外的34個特征峰用于相似度評價，統一積分后進行相似度計算，樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜比較的相似度不得低于0.90。