[發(fā)明專利]檢測凍存母乳中脂溶性維生素的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210410105.9
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114778727A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王天一;李艷杰;周傳貴;李艷;胡瑋;程文播;周玉松;覃素姿;楚士穎;張怡銘;韓竑宣;朱思宇
• 申請（專利權(quán)）人: 天津國科醫(yī)工科技發(fā)展有限公司;蘇州國科醫(yī)工科技發(fā)展（集團(tuán)）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11369
• 代理人: 楊明霞

本發(fā)明公開了一種檢測凍存母乳中脂溶性維生素的方法，包括以下步驟：1)樣本前處理：1?1)取凍存母乳樣本解凍，加入內(nèi)標(biāo)沉淀劑，渦旋震蕩；1?2)加入正己烷，然后加入飽和氯化鈉溶液抑制乳化，渦旋混勻；1?3)離心，取上清液，40℃氮氣下吹干，再使用復(fù)溶液復(fù)溶，渦旋震蕩；1?4)離心，濾膜過濾，留上清液，得到測試樣；2)采用液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜方法對測試樣進(jìn)行脂溶性維生素的定量檢測，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到凍存母乳樣本中的脂溶性維生素的含量。本發(fā)明采用液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)能同時檢測母乳中四種脂溶性維生素的水平，該方法具有靈敏度高、定量限低、分析時間短、分析速度快等優(yōu)點，具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測凍存母乳中脂溶性維生素的方法。

背景技術(shù)

近年來的研究表明維生素D不但發(fā)揮調(diào)節(jié)鈣磷代謝，維持骨骼健康的作用，而且對骨骼外系統(tǒng)發(fā)揮重要作用。母乳是嬰兒幾乎全部的食物來源，故母乳中VitD的水平直接影響嬰兒對VitD的利用。我國VD缺乏的情況很嚴(yán)重，孕婦及新生兒VD缺乏在40％～100％之間，VD充足不到10％，提示母乳喂養(yǎng)的嬰兒更需要額外VitD補(bǔ)充劑。由于母乳中的VD水平取決于母親體內(nèi)的VD水平，通常含量較低，其數(shù)量并不足以防止軟骨病。但大劑量服用維生素D可以引起中毒，甚至?xí)霈F(xiàn)更嚴(yán)重的副作用。故檢測檢測母乳中維生素D含量對嬰兒補(bǔ)充維生素D起重要作用。

母乳是嬰兒的最理想食物來源，母乳中的VA受母親的膳食攝入、膳食中的脂肪含量、母親本身的VA狀態(tài)、生活習(xí)慣等多種因素影響，哺乳期媽媽和嬰兒是VA缺乏的風(fēng)險人群，需要提高對VA的認(rèn)識；另有研究表明，母乳中維生素A含量在初乳期和牛乳的含量相近,但隨著哺乳期的加長,母乳中維生素A的含量呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢，所以規(guī)范使用VA并加強(qiáng)對家長的健康科普，從而保證母親及嬰兒的健康。

研究表明，圍產(chǎn)期口服補(bǔ)充維生素E能顯著提高母乳中維生素E含量，這提示孕產(chǎn)婦近期維生素E的攝取狀況對母乳中維生素E濃度影響很大。另外，母乳作為一種良好的維生素E供給源，更利于更易于嬰兒吸收，成為防治新生兒維生素E缺乏的一種有效方法

所以，母乳中諸如維生素D、維生素A、維生素E等脂溶性維生素的定量檢測具有重要意義，但現(xiàn)在未見公開可靠的方案。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種檢測凍存母乳中脂溶性維生素的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種檢測凍存母乳中脂溶性維生素的方法，包括以下步驟：

1)樣本前處理：

1-1)取凍存母乳樣本解凍，加入內(nèi)標(biāo)沉淀劑，渦旋震蕩；

1-2)加入正己烷，然后加入飽和氯化鈉溶液抑制乳化，渦旋混勻；

1-3)離心，取上清液，40℃氮氣下吹干，再使用復(fù)溶液復(fù)溶，渦旋震蕩；

1-4)離心，濾膜過濾，留上清液，得到測試樣；

2)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法對測試樣進(jìn)行脂溶性維生素的定量檢測，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到凍存母乳樣本中的脂溶性維生素的含量；

其中，所述脂溶性維生素至少包括維生素A、25-羥基維生素D2、25-羥基維生素D3、維生素E中的一種或多種。

優(yōu)選的是，所述步驟1)具體包括：

1-1)取凍存母乳樣本解凍，加入內(nèi)標(biāo)沉淀劑，渦旋震蕩30-120s；

1-2)加入正己烷，然后加入飽和氯化鈉溶液抑制乳化，1250-5000轉(zhuǎn)/分下渦旋混勻2-10min；

1-3)于4℃、7000-28000轉(zhuǎn)/分離心5-20min，取上清液，40℃氮氣下吹干，再使用復(fù)溶液復(fù)溶，渦旋震蕩2-10min；