[發明專利]膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202210409202.6
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114675027B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 張晶晶;晁潔
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

本發明公開了一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒及其檢測方法，試劑盒包括：電極、用于特異性識別膀胱癌蛋白類標志物的功能化發光探針、用于特異性識別膀胱癌蛋白類標志物的捕獲探針，所述捕獲探針、膀胱癌蛋白類標志物和功能化發光探針可通過免疫結合作用形成三明治夾心結構，所述檢測試劑盒和檢測方法，基于電位分辨可同時檢測至少兩種膀胱癌蛋白類標志物，并通過DNA四面體結構提高電極界面的免疫結合的可控性和結合效率以提高檢測靈敏度。

技術領域

本發明涉及生物檢測化學分析技術領域，特別是涉及膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒及非診斷目的的多種膀胱癌蛋白類標志物同時檢測方法。

背景技術

膀胱癌是一種高發病率和致死率的惡性腫瘤疾病，是男性泌尿系統最常見的惡性腫瘤之一，目前，膀胱鏡檢查是膀胱癌診斷的金標準，但這種方法具有一定的侵入性，涉及創傷性檢查，容易導致患者的尿路感染，并且在膀胱癌的早期診斷中，這種傳統的檢測方法靈敏度和特異性較低，容易出現較高的假陽性率。

膀胱癌的發生會對血液和尿液的成分產生直接影響，通過非侵入性的液體活檢在特異性上明顯優于膀胱鏡檢查，可以對多種生物標志物聯合分析檢測，且液體活檢具有較高的效率，檢測時間一般在幾分鐘之內，可以實現對腫瘤標志物的快速檢測；除此之外，液體活檢還容易實現便攜化，具有非常好的應用前景。

目前，已發展多種基于液體活檢的相關試劑用于膀胱癌標志物的檢測，包括酶聯免疫、熒光等等，但是，這些相關試劑檢測依賴于昂貴的儀器、檢測過程費時費力，需要大量的樣本，而且檢測靈敏度和特異性仍有較大的提升空間。

電致化學發光ECL免疫傳感器是一種將電化學發光技術與免疫分析方法相結合的而發展的具有高靈敏度、高選擇性、低背景等優點的生物傳感器，免疫抗原抗體作為識別元件，通過自組裝方法固定在電極上，通過信號分子與待測分析物濃度的轉化實現對待測的定量檢測。此外，ECL免疫傳感器還具有設備相對簡單，適合聯機化，容易微型化等優點，成功應用在醫學、環境和食品安全檢測等多領域；現有技術中已開發有將上述電致化學發光ECL免疫傳感器用于液體活檢的技術方案，例如，公開號為CN 104483481 B的專利提供了一種基于碳納米管/PdPt納米籠構建的膀胱癌標志物-NMP22免疫傳感器，采用碳納米管/PdPt納米籠復合材料來作為檢測抗體標記物，一定程度上提高了免疫傳感器的靈敏度和穩定性，對膀胱癌標志物NMP22的檢測限可達0.21pg/mL，但這種檢測免疫傳感器和檢測方法并不能實現多種膀胱癌標志物的同時檢測且其靈敏度有限，并不適用于早期膀胱癌標志物的篩查。

發明內容

針對現有膀胱癌標志物檢測試劑和方法存在儀器昂貴、樣本量多、操作復雜以及檢測靈敏度低的技術問題，本發明提供一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒及其檢測方法，所述檢測試劑盒和檢測方法，基于電位分辨可同時檢測至少兩種膀胱癌蛋白類標志物，并通過DNA四面體結構提高電極界面的免疫結合的可控性和結合效率以提高檢測靈敏度。

本發明所采用的技術方案是：

因此，在第一個方面，本發明提供一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其包括：電極、用于特異性識別膀胱癌蛋白類標志物的功能化發光探針、用于特異性識別膀胱癌蛋白類標志物的捕獲探針；所述捕獲探針、膀胱癌蛋白類標志物和功能化發光探針可通過免疫結合作用形成三明治夾心結構；

其中，所述電極由玻碳電極電沉積金構成；

其中，圖1a所示，所述功能化發光探針至少包括：第一功能化發光探針和第二功能化發光探針；所述第一功能化發光探針為第一蛋白類標志物的I類二抗修飾第一發光體制成；第二功能化發光探針為第二蛋白類標志物的II類二抗修飾第二發光體制成；具體修飾方式是通過在第一發光體或第二發光體上原位長金，利用納米金顆粒與蛋白質之間的Au-N鍵作用將二抗修飾在第一發光體或第二發光體上；