[發明專利]膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202210409202.6
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114675027B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 張晶晶;晁潔
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

1.一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括，電極、用于特異性識別膀胱癌蛋白類標志物的功能化發光探針、用于特異性識別膀胱癌蛋白類標志物的捕獲探針，所述捕獲探針、膀胱癌蛋白類標志物和功能化發光探針可通過免疫結合作用形成三明治夾心結構，其中，所述電極由玻碳電極電沉積金構成；

其中，所述功能化發光探針至少包括：第一功能化發光探針和第二功能化發光探針；所述第一功能化發光探針為第一膀胱癌蛋白類標志物的I類二抗修飾第一發光體制成；第二功能化發光探針為第二膀胱癌蛋白類標志物的II類二抗修飾第二發光體制成；具體修飾方式是通過在第一發光體或第二發光體上原位長金，利用納米金顆粒與蛋白質之間的Au-N鍵作用將二抗修飾在第一發光體或第二發光體上；

其中，所述捕獲探針至少包括：第一捕獲探針和第二捕獲探針，所述第一捕獲探針為第一膀胱癌蛋白類標志物的I類一抗修飾DNA四面體制成；所述第二捕獲探針為第二膀胱癌蛋白類標志物的II類一抗修飾DNA四面體制成；所述DNA四面體由四條DNA片段自組裝而成，形成的DNA四面體結構具有巰基官能團、氨基官能團，所述巰基官能團通過Au-S共價鍵作用修飾在所述電極上；氨基官能團通過戊二醛將所述一抗修飾在DNA四面體結構上；

所述第一發光體為Ru(bpy)₃²⁺-MOF，所述第二發光體為AuAgNCs；

所述DNA四面體由四條DNA片段自組裝而成，所述四條DNA片段的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

2.根據權利要求1所述的一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其特征在于，所述DNA四面體制備過程包括：將所述四條DNA片段的序列以摩爾比1：1：1：1的比例在TM 緩沖液中混合均勻后，95 ℃退火5min，然后降至4 ℃，形成DNA四面體。

3.根據權利要求2所述的一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其特征在于，所述捕獲探針制備過程包括：向所述DNA四面體中加入戊二醛溶液，室溫反應30 min后，再分別加入所述I類一抗和所述II類一抗，繼續反應30 min，將所得的溶液經超濾管超濾后，即得到所述第一捕獲探針和第二捕獲探針。

4.根據權利要求1所述的一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其特征在于，所述電極制備過程包括：將玻碳電極經打磨、超聲、清洗得到干凈的電極表面；將玻碳電極至于5mM HAuCl₄中施加-0.2V恒電壓進行電化學沉積，使電極表面均勻沉積一層納米金顆粒，構成所述電極。

5.根據權利要求1所述的一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其特征在于，膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒包括：

第一試劑容器，該第一試劑容器包含所述電極；

第二試劑容器，該第二試劑容器包含所述捕獲探針；

第三試劑容器，該第三試劑容器包含所述功能化發光探針；

第四試劑容器，該第四試劑容器包含磷酸鹽緩沖液PBS；

第五試劑容器，該第五試劑容器包含磷酸鹽緩沖液PBS、TPrA和K₂S₂O₈。

6.根據權利要求1所述的一種膀胱癌蛋白類標志物活性檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括以下檢測步驟：

步驟S1，獲取待檢測樣本提取液；

步驟S2，將所述捕獲探針利用Au-S共價鍵作用修飾在所述電極上構建ECL傳感平臺；

步驟S3，向步驟S2構建的ECL傳感平臺上滴加所述待檢測樣本提取液進行孵育；

步驟S4，將步驟S3孵育后的ECL傳感平臺經過磷酸鹽緩沖液PBS清洗后，滴加所述的功能化發光探針，繼續孵育；

步驟S5，將步驟S4孵育后ECL傳感平臺經磷酸鹽緩沖液PBS清洗后，進行ECL檢測。