[發明專利]一種2-乙酰王百合苷A對照品的制備方法

有效

• 申請號: 202210408717.4
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114773406B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 冉波;閻志鵬;黎先智;張付先;吳明春;顏洪榮
• 申請（專利權）人: 成都格利普生物科技有限公司
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H15/06
• 代理公司: 成都誠中致達專利代理有限公司 51280
• 代理人: 吳飛

1.一種2-乙酰王百合苷A對照品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，百合液提取；對百合鱗莖通過溫浸、過濾、提取液合并，并獲得百合提取液；

步驟1中百合液提取的步驟為：

步驟1.1，將百合鱗莖加入80%甲醇或乙醇中在65℃溫度下進行浸泡；

步驟1.2，將浸泡后所得溶液進行多次過濾，去除殘留的固體物；

步驟1.3，將步驟1.2所得過濾后的提取液進行合并；

步驟1.4，將步驟1.3所得提取液中的乙醇通過降低壓強的方式進行分離并回收，同時獲得百合液提取液；

步驟2，2-乙酰王百合苷A粗品制備；對步驟1獲得的百合提取液通過離心、聚合物吸附色譜、梯度洗脫、濃縮的方式獲得2-乙酰王百合苷A的粗品；

步驟2中2-乙酰王百合苷A粗品制備的步驟為：

步驟2.1，對步驟1中所得的百合提取液通過離心裝置進行離心，去除固形物，獲得離心后溶液；

步驟2.2，對步驟2.1中所得離心后溶液通過水進行稀釋，并獲得稀釋后的溶液；

步驟2.3，對步驟2.2中所得稀釋后的溶液通過吸附色譜；

步驟2.4，對步驟2.3中吸附色譜填料水洗脫至無色，并棄去洗脫液；

步驟2.5，對步驟2.4中吸附色譜填料用甲醇或乙醇洗脫至無色，6個柱體積，收集洗脫液；

步驟2.6，對步驟2.5中使用的色譜柱通過甲醇或乙醇進行清洗，以待再生色譜填料重復使用；

步驟2.7，對步驟2.5所收集的洗脫液濃縮至無醇味，并得到初步濃縮液；

步驟2.8，對步驟2.7中所得的初步濃縮液再次通過吸附色譜填料，而后通過甲醇或乙醇對吸附填料進行洗脫，并對所得的洗脫液進行濃縮，并獲得2-乙酰王百合苷A粗品；

步驟2中的吸附色譜為NM-200聚合物色譜；

步驟3，2-乙酰王百合苷A粗品的制備液相分離純化；對步驟2所得的2-乙酰王百合苷A粗品通過溶解、微孔濾膜過濾、制備液相分離純化、濃縮、結晶后得2-乙酰王百合苷A結晶；

步驟3中2-乙酰王百合苷A粗品的純化結晶的步驟為：

步驟3.1，對步驟2中所得的2-乙酰王百合苷A粗品加水溶解；

步驟3.2，對步驟3.1中所得的2-乙酰王百合苷A粗品溶液通過微孔濾膜進行過濾；

步驟3.3，對步驟3.2中所得過濾后的2-乙酰王百合苷A粗品溶液通過制備型高效液相色譜進行純化，同時通過紫外檢測器波長310nm監視流出曲線，依據流出曲線，收集流出液；

步驟3.4，對步驟3.3中所得流出液濃縮至無醇味，并經NM-200聚合物吸附色譜填料，待上樣后，用甲醇或乙醇進行洗脫，并將濃縮洗脫液，靜置24h，析出2-乙酰王百合苷A結晶；

步驟3.3中制備型高效液相色譜的色譜柱為十八烷基鍵合硅膠；

流動相為乙腈-水，且乙腈-水的比例為15：85；

步驟4，2-乙酰王百合苷A的獲取；通過溶解及靜置結晶獲得2-乙酰王百合苷A；

步驟4中2-乙酰王百合苷A的獲取步驟為：

步驟4.1，取步驟3所得的2-乙酰王百合苷A結晶用甲醇溶解，晶體與甲醇的比例為1g：10ml至1g：15ml；

步驟4.2，對步驟4.1溶解后的2-乙酰王百合苷A溶液靜置并等待再次結晶；

步驟4.3，重復步驟4.1與步驟4.2兩次至三次，最終得得2-乙酰王百合苷A。

2.根據權利要求1所述的2-乙酰王百合苷A對照品的制備方法，其特征在于，步驟2.5中甲醇或乙醇的濃度為20%-40%、步驟2.6中甲醇或乙醇的濃度為80%-100%及步驟2.8中甲醇或乙醇的濃度為80%-100%。

3.根據權利要求1所述的2-乙酰王百合苷A對照品的制備方法，其特征在于，流動相的流速為180ml/min。