[發明專利]水產養殖益生菌及其菌劑制備與應用

有效

• 申請號: 202210407502.0
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114507629B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 呂劍;王建華;武君;殷璐璐;王娜
• 申請（專利權）人: 中國科學院煙臺海岸帶研究所;海陸達（山東）農業科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/20;A01P1/00;A01P3/00;C02F3/34;A23K50/80;A23K10/12;A23K10/26;A23K10/30;A23K10/37;A23K20/147;A23K20/163;C12R1/01;C02F103/20
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

1.一種水產養殖益生菌，其特征在于：水產養殖益生菌為腸球菌Enterococcus sp.YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌Brevibacillus sp. YTLJ-N-SXH2；

所述腸球菌Enterococcus sp. YTLJ-N-SXH1，分類學命名為Enterococcus sp. ，已于2021年11月26日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏地址中國廣州，保藏編號為GDMCCNo：62080；

所述短芽孢桿菌Brevibacillus sp. YTLJ-N-SXH2，分類學命名為Brevibacillus sp.，已于2022年1月17日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏地址中國廣州，保藏編號為GDMCC No：62215。

2.按權利要求1所述的水產養殖益生菌的應用，其特征在于：所述水產養殖益生菌腸球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2在對養殖環境的凈化中的應用。

3.一種水產養殖益生菌劑，其特征在于：菌劑含權利要求1所述的腸球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2。

4.按權利要求3所述的水產養殖益生菌劑，其特征在于：所述菌劑含腸球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2，其中，擴繁后的腸球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2按10-50:1-10質量比混合，菌劑中總有效活菌數≥1.0×10⁹個/mL。

5.權利要求4所述的水產養殖益生菌劑的制備方法，包括如下步驟：

1）菌種擴繁：將腸球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2分別按5-10wt%接種至改進的擴繁培養基，于溫度28-35 ℃下培養24-72小時，而后分離收集沉淀細菌；

2）混合菌粉制備：將上述擴繁后收集的腸球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2單一菌分別通過冷凍干燥，獲得單一菌株干粉，然后將單一菌株干粉按10-50:1-10質量比混合得混合菌粉；

3）助劑制備：糞便殘餌、玉米粉和豆粕等質量混合獲得混合物，而后加入混合物質量0.1%～1.0%的步驟2）所得混合菌粉、加入混合物質量 0.05%～0.5%的NH₄NO₃、加入混合物質量0.05%～0.5%的Cu(NO₃)₂，混合均勻后至混合體系含水量為40%～60%， pH為6.5～7.5，于28-35℃下發酵培養5～10天，發酵收集沉淀發酵物，向干燥后發酵物中加入其質量0.1%～0.5%的鎂改性短芽孢桿菌抗菌肽和其質量0.5%～1.0%的菊粉，混合后即為助劑；

4）菌劑制備：將步驟2）所得混合菌粉與步驟3）所得助劑按1:1-100質量比混合，制得水產養殖益生菌劑；

所述步驟1）擴繁培養基為質量比計，0.05-0.1% NH₄NO₃、0.05-0.1% NH₄NO₂、0.2-1% 乙酸鈉、2-5% K₂HPO₄、1-3% MgSO₄、1-3% NaCl，0.01-0.05% FeSO₄、0.01-0.05% MnSO₄和0.01-0.05%La(NO₃)₃，余量為水；

所述步驟1）菌株進行擴繁時，向擴繁培養基中加入其質量0.02-0.2%的硝基咪唑類抗生素和其質量的0.001-0.01%對硝基苯胺，即獲得改進的擴繁培養基；

所述步驟3）中鎂改性短芽孢桿菌抗菌肽為將按照步驟1）擴繁獲得短芽孢桿菌YTLJ-N-SXH2培養物經過濾收獲細菌，而后向收集細菌中添加其質量70-75%的硫酸銨和其質量10-12%的鎂鹽，混合后調節體系pH至9.0-10.0，而后靜置1-2天，靜置后冷凍干燥得短芽孢桿菌抗菌肽粗品，向粗品中加入其質量0.1-1%的納米氧化鎂、其質量0.1-1%的碳酸鈣和其質量0.01%-0.1%的硝酸鑭混合均勻制得鎂改性短芽孢桿菌抗菌肽，存儲于干燥處待用。

6.一種權利要求3所述的水產養殖益生菌劑的應用，其特征在于：所述菌劑在水產養殖凈化中的應用。