[發明專利]一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法及其應用有效
| 申請號： | 202210405664.0 | 申請日： | 2022-04-18 |
| 公開（公告）號： | CN114686421B | 公開（公告）日： | 2023-10-10 |
| 發明（設計）人： | 龔逸鴻;葉浩;韋秋君;王奇璇;羅語溪;李燕;曹聰;李晉澤 | 申請（專利權）人： | 中山大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12N5/00;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 深圳市創富知識產權代理有限公司 44367 | 代理人： | 高冰 |
| 地址： | 510275 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 組織 細胞 基質 載體 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，首先利用乙醇使肺組織中的蛋白交聯固定，然后使用SDS和trypsin/EDTA進行脫細胞處理，脫細胞后再用NaCl溶液和明膠溶液去除殘留試劑，最后使用胃蛋白酶溶液消化制備得到脫細胞外基質微載體。
2.根據權利要求1所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、將肺組織浸泡于75％乙醇中，使組織發生蛋白交聯固定；
S2.將步驟S1中的肺組織浸泡于SDS溶液和trypsin/EDTA溶液中進行脫細胞處理，得到脫細胞化的肺組織；
S3.將步驟S2中脫細胞化的肺組織浸泡于明膠溶液和NaCl溶液中，清洗去除殘留的試劑；
S4.將步驟S3中脫細胞化的肺組織浸泡于胃蛋白酶溶液中進行消化，得到脫細胞外基質微載體。
3.根據權利要求2所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，所述肺組織為豬肺組織。
4.根據權利要求3所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，所述豬肺組織取自肺葉遠離支氣管、次級支氣管的尖端部分。
5.根據權利要求2所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，SDS溶液的濃度為1％，SDS溶液的浸泡溫度為室溫，時間不少于24h。
6.根據權利要求2所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，trypsin/EDTA溶液的濃度為0.25％，trypsin/EDTA溶液的浸泡溫度為37℃，時間不少于24h。
7.根據權利要求2所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，胃蛋白酶溶液的濃度為1mg/mL，胃蛋白酶溶液的浸泡溫度為37℃，時間不少于72h。
8.根據權利要求2所述的一種肺組織脫細胞外基質微載體的制備方法，其特征在于，明膠溶液的濃度為0.3％，明膠溶液的浸泡溫度為室溫，時間不少于1h；NaCl溶液的濃度為1M，NaCl溶液的浸泡溫度為室溫，浸泡次數為2次，每次浸泡不少于0.5h。
9.采用權利要求1-8任一項所述的制備方法制備得到的肺組織脫細胞外基質微載體。
10.權利要求9所述的肺組織脫細胞外基質微載體在細胞培養中的應用。
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