[發明專利]一種脫水四環素誘導的大腸桿菌-枯草芽孢桿菌通用型誘導表達系統

有效

• 申請號: 202210402398.6
• 申請日: 2022-04-18
• 公開（公告）號: CN114645062B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;劉延峰;李洋;武耀康
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/75;C07K14/245;C12N15/31;C07K14/435;C12R1/19;C12R1/125
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種阻遏蛋白tetR表達框，其特征在于，所述表達框由核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?3所示啟動子P21、核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?9所示的RBS序列和阻遏蛋白tetR構成，所述阻遏蛋白為，將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.?2所示的阻遏蛋白tetR的第119位的苯丙氨酸突變為酪氨酸得到的；

或所述表達框由核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?3所示啟動子P21、核苷酸序列如SEQ?IDNO.?9所示的RBS序列和氨基酸序列如SEQ?ID?NO.?2所示的阻遏蛋白tetR構成；

或所述表達框由核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?3所示啟動子P21、核苷酸序列如SEQ?IDNO.?4所示的RBS序列和阻遏蛋白tetR構成，所述阻遏蛋白為，將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的阻遏蛋白tetR的第119位的苯丙氨酸突變為酪氨酸得到的。

2.一種表達系統，其特征在于，所述表達系統由表達載體、權利要求1所述的表達框及目的基因構成，所述目的基因含有P_tet啟動子。

3.如權利要求2所述的表達系統，其特征在于，所述目的基因包括超級折疊綠色熒光蛋白、綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、藍色熒光蛋白、β-葡萄糖醛酸苷酶、β-半乳糖苷酶或參與微生物代謝調控的基因。

4.如權利要求2或3所述的表達系統，其特征在于，所述表達載體包括pHT01質粒、pSTOP1622質粒、pJOE8999質粒或pAD123質粒。

5.如權利要求4所述的表達系統，其特征在于，所述P_tet啟動子核苷酸序列如SEQ?IDNO.?7所示。

6.一種重組細胞，其特征在于，所述重組細胞中含有權利要求1所述的阻遏蛋白tetR表達框，或權利要求2~5任一所述的表達系統；所述重組細胞以大腸桿菌或枯草芽孢桿菌為表達宿主。

7.如權利要求6所述的重組細胞，其特征在于，所述大腸桿菌包括E.coli?JM109、E.coli?JM110、E.coli?DH5α或E.coli?BL21；所述枯草芽孢桿菌包括B.?subtilis?168、B.?subtilis?WB600、B.?subtilis?WB800。

8.權利要求1所述的阻遏蛋白tetR表達框在采用大腸桿菌或枯草芽孢桿菌進行目的基因表達中的應用，其特征在于，所述目的基因含有P_tet啟動子。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述目的基因包括超級折疊綠色熒光蛋白、綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、藍色熒光蛋白、β-葡萄糖醛酸苷酶、β-半乳糖苷酶或參與微生物代謝調控的基因。