[發明專利]貝萊斯芽孢桿菌和乳酸片球菌分步發酵花生粕的生產方法及其應用

有效

• 申請號: 202210401119.4
• 申請日: 2022-04-15
• 公開（公告）號: CN114631601B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 李沖;鄧雪娟;李淑珍;蔡輝益;王春雨;王騰飛
• 申請（專利權）人: 天津博菲德科技有限公司;博菲德生物工程研究（天津）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K50/75;A23K10/12;A23K10/37;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 北京蕙識同聯專利代理事務所(特殊普通合伙) 11966
• 代理人: 趙雪

1.一種貝萊斯芽孢桿菌和乳酸片球菌分步發酵花生粕的生產方法，其特征在于：包括如下步驟，

（1）原料的預處理：花生粕粉碎后過篩，高壓蒸汽滅菌后冷卻至室溫；

（2）階段一發酵：準備活化好的出發菌株發酵接種液接種于滅菌后的花生粕中，接種量為2.0%~4.0%，水分含量36.0%~42.0%，充分混合均勻，發酵溫度為36.0~39.0℃，發酵時間48~60h，保持有氧環境，進行第一階段發酵；具體階段一發酵菌株為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）LB-Y-1，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC No. 21344；

（3）調整出料：將發酵后的物料混合均勻，出料；

（4）階段二發酵：準備活化好的出發菌株發酵接種液接種于上述產出物料，接種量為1.8%~3.3%，水分含量至39.0%~46.0%，充分混合均勻，發酵溫度為35.0~39.0℃，發酵時間10~16h，分裝至呼吸袋，保持無氧環境，進行第二階段發酵；具體階段二發酵菌株為乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）LC-9-1，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC NO. 21345；

（5）調整出料：發酵結束后混合均勻，45~50℃條件下低溫烘干，保證最終產品水分控制在9.5%~10.5%，物料粉碎并過篩，混合均勻后出料即為最終發酵產物。

2.如權利要求1的生產方法，其特征在于：所述步驟（1）原料的預處理：花生粕粉碎后過篩，目數為10~20目，121℃高壓蒸汽滅菌15min，結束后冷卻至室溫；所述步驟（5）調整出料：發酵結束后混合均勻，低溫烘干，控制烘干溫度48℃，保證最終產品水分控制在10.0%，物料粉碎并過18目篩，混合均勻后出料即為最終發酵產物。

3.如權利要求1的生產方法，其特征在于：上述步驟（2）和（4）是通過單因素實驗、Plackett-Burman實驗、Box-Behnken實驗明確接種量、水分含量、發酵溫度和發酵時間工藝參數；具體為將發酵接種液接種于滅菌后的花生粕中，將水分含量、接種量、發酵時間和發酵溫度作為自變量，階段一的TCA-N含量和階段二的總酸含量作為因變量，首先通過單因素實驗，確定后續試驗的自變量選擇范圍及Plackett-Burman試驗的極值，按照各參數進行充分混合，階段一有氧和階段二無氧條件下發酵；根據上述單因素試驗的結果設計Plackett-Burman的各項參數，發酵操作流程同單因素試驗，根據標準正態效應及帕累托圖分析判定，對TCA-N含量或總酸含量影響顯著的自變量，在Box-Behnken試驗設計中只考慮影響顯著的自變量。

4.如權利要求1的生產方法，其特征在于：所述步驟（2）階段一發酵：準備活化好的出發菌株發酵接種液接種于滅菌后的花生粕中，最終工藝：接種量為2.0%，水分含量為37.38%，充分混合均勻，發酵溫度為38.18℃，發酵時間為54.41h，每4h翻料一次，保持有氧環境，進行第一階段發酵；所述步驟（4）階段二發酵：準備活化好的出發菌株發酵接種液接種于上述產出物料，最終工藝：接種量為1.89%，水分含量至40.00%，充分混合均勻，發酵溫度為37.11℃，發酵時間12.42h，分裝至呼吸袋，保持無氧環境，進行第二階段發酵。