[發(fā)明專利]一種‘秋月梨’愈傷組織的誘導(dǎo)方法及應(yīng)用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210387428.0
• 申請日: 2022-04-14
• 公開（公告）號: CN114521493A
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 石海燕;徐悅;霍利月;李曉娜;楊雄
• 申請（專利權(quán)）人: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種‘秋月梨’愈傷組織的誘導(dǎo)方法，首先采集‘秋月梨’的花蕾，然后將花蕾中的花藥取出，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)30~50天，獲得花藥愈傷組織，將誘導(dǎo)出的花藥愈傷組織接種增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，從而獲得愈傷組織。本發(fā)明還公開了所得愈傷組織的應(yīng)用方法，首先使用攜帶外源基因的根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織，然后接種到共培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)3天；暗培養(yǎng)結(jié)束后洗滌，在無菌濾紙上吸干水分后轉(zhuǎn)移到篩選培養(yǎng)基中篩選，得到抗性愈傷組織。該方法采用‘秋月梨’的花藥為外植體在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)和增殖，順利得到了‘秋月梨’的花藥愈傷組織，并經(jīng)遺傳轉(zhuǎn)化獲得了抗性愈傷組織。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種‘秋月梨’花藥愈傷的誘導(dǎo)方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

‘秋月梨’為薔薇科梨屬栽培品種，是用162-29（新高×豐水）×幸水雜交育成的中晚熟褐色砂梨新品種。‘秋月梨’抗寒力強(qiáng)，耐干旱；果實略呈扁形，果形端正，果皮黃褐色，果肉乳白色，果核小，可食率95%以上。其肉質(zhì)細(xì)脆，汁多味甜，清香爽口，石細(xì)胞極少，品質(zhì)極優(yōu)，具有研究價值。同時，在植物分子遺傳研究中，構(gòu)建愈傷組織再生系統(tǒng)相較于其他再生方式，試材更易于接受外源基因、轉(zhuǎn)化率高、擴(kuò)繁量大。但是在獲取‘秋月梨’愈傷組織的過程中，發(fā)現(xiàn)利用莖、葉等外植體誘導(dǎo)時，會出現(xiàn)褐變現(xiàn)象而難以成功誘導(dǎo)出愈傷組織，因此，針對‘秋月梨’這種新品種，如何獲取其愈傷組織以便進(jìn)行更有效的研究和應(yīng)用，是本領(lǐng)域急需解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種‘秋月梨’愈傷組織的誘導(dǎo)方法，該方法采用‘秋月梨’的花藥為外植體在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)和增殖，順利得到了‘秋月梨’的花藥愈傷組織。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：

一種‘秋月梨’愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟：

步驟S10：采集‘秋月梨’的花蕾，在3~5℃下放置3~5天；

步驟S20：將放置后的所述花蕾清洗和消毒，然后將花蕾中的花藥取出，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)30~50天，獲得花藥愈傷組織，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：1/2MS+19~21 g/L蔗糖+1.3~1.7 mg/L 2,4-D+0.8~1.2 mg/L 6-BA+6~8 g/L瓊脂，pH 5.8~6.2；

步驟S30：將誘導(dǎo)出的花藥愈傷組織接種增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，從而獲得愈傷組織，所述增殖培養(yǎng)基為：1/2MS+19~21 g/L蔗糖+0.8~1.2 mg/L 2,4-D+0.8~1.2 mg/L6-BA+6~8 g/L瓊脂，pH 5.8~6.2。

優(yōu)選的，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2MS+20 g/L蔗糖+1.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+7 g/L瓊脂，pH 5.8~6.2；所述增殖培養(yǎng)基為1/2MS+20 g/L蔗糖+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L6-BA+7 g/L瓊脂，pH 5.8~6.2。

優(yōu)選的，在步驟S20中，所述清洗為用無菌水洗3~5遍，去掉花蕾表面的灰塵；所述消毒為使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)75％的酒精浸泡清洗后的花蕾30 s，然后再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1％HgCl₂處理8~10 min，無菌水清洗3~5次后用無菌濾紙吸干花蕾表面水分。

優(yōu)選的，在步驟S20中，所述暗培養(yǎng)的溫度為25±2℃。

優(yōu)選的，在步驟S30中，所述增殖培養(yǎng)在暗環(huán)境中進(jìn)行，培養(yǎng)溫度為25±2℃，每30~40天進(jìn)行一次繼代。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種‘秋月梨’愈傷的應(yīng)用方法，以獲得抗性愈傷組織，采取如下技術(shù)方案：

一種‘秋月梨’愈傷組織的應(yīng)用方法，包括如下步驟：