[發明專利]附子的多元統計分析方法

有效

• 申請號: 202210387097.0
• 申請日: 2022-04-13
• 公開（公告）號: CN114965735B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 劉廣學;侯金才;黃熙凱;鄒妍;尚明英;徐風;蔡少青
• 申請（專利權）人: 神威藥業集團有限公司;京津冀聯創藥物研究（北京）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京匯智英財專利代理有限公司 11301
• 代理人: 陳雅靜

本發明提供一種附子的多元統計分析方法，屬于藥物檢測技術領域，所述附子的多元統計分析方法是分別利用高效液相色譜和高效液相色譜串聯質譜聯用檢測附子制品及煻灰炮附子，并分別獲得附子制品及煻灰炮附子中6種烏頭堿類生物堿含量和相應的化學色譜峰峰面積，從化學色譜峰中選取14個分析色譜峰，將14個分析色譜峰的峰面積和6種烏頭堿類生物堿含量作為數據一并進行主成分分析、偏最小二乘?判別分析和聚類分析，獲得分析結果。本發明采用多元統計分析方法對不同附子制品的化學成分進行了研究和比較，為煻灰炮附子在經典名方中的應用提供理論依據和數據支持。

技術領域

本發明涉及藥物檢測技術，尤其涉及一種附子的多元統計分析方法。

背景技術

附子為毛茛科植物烏頭Aconitum?carmichaelii?Debx.的子根的加工品，主要功效為回陽救逆，補火助陽，散寒止痛。附子中的二萜生物堿還具有明顯的降壓、抑制心肌縮力和抗心律失常作用，而與其水溶性成分則具有升壓、強心作用，附子中的雙酯型二萜生物堿則能夠改善心律失常。

附子作為重要的常用中藥，在真武湯、附子湯、桂枝芍藥知母湯、溫脾湯和小續命湯等經典名方中均有使用，因其具有明顯的毒性和療效，常需炮制加工后使用。而炮制加工方法的改變也勢必會影響不同附子加工品的藥理活性和安全性。

煻灰炮附子在古代(尤其是唐朝之前)已經過長期臨床使用，表明在炮制加工得當、規范煎煮的前提下，煻灰炮附子的安全性和藥理活性得到了很大認可。鑒于煻灰炮附子在經典名方中的廣泛使用及其古今炮制加工的差異，以煻灰炮附子中所含化學成分的研究并分析，對建立使用了煻灰炮附子的經典名方的質量標準至關重要。此外，由于附子的煻灰古法炮制過程中，存在不易掌握火候的困難、附子加工時易出現烤焦或者烤制時間不足的問題，也容易造成加工藥材的浪費，對煻灰炮附子的化學成分進行研究并分析，為尋找能夠代替古法煻灰炮附子的現代加工附子制品提供科學依據。

發明內容

針對上述問題，本發明提供一種附子的多元統計分析方法。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為：

一種附子的多元統計分析方法，所述多元統計分析方法包括以下步驟：

1)利用高效液相色譜檢測附子制品及煻灰炮附子，并分別獲得附子制品及煻灰炮附子中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿共6種烏頭堿類生物堿含量；

利用高效液相色譜串聯質譜聯用檢測附子制品及煻灰炮附子，獲得相應的化學色譜峰峰面積，并確認煻灰炮附子所得化學色譜峰對應的活性成分；

從煻灰炮附子所得的18個化學色譜峰中選取14個峰面積較大的分析色譜峰(主要色譜峰)作為分析對象；選取過程中，排除33號化學色譜峰，原因是33號色譜峰雖然具有最高的峰面積，但在HPLC-IT-TOF-MSn液質分析中未得到任何母離子和碎片離子信息；

2)將測得的附子制品和煻灰炮附子中6種烏頭堿類生物堿含量、檢測附子制品和煻灰炮附子獲得的14個分析色譜峰的峰面積作為數據一并進行主成分分析(PCA)、偏最小二乘-判別分析(PLS-DA)和聚類分析(CA)，獲得分析結果。

進一步的，主成分分析(PCA)、偏最小二乘-判別分析(PLS-DA)和聚類分析(CA)采用軟件Metaboanalyst4.0進行分析；聚類分析方法為系統聚類法(HierarchicalClustering)。

進一步的，所述高效液相色譜串聯質譜聯用檢測中附子制品及煻灰炮附子需制備相應的附子供試品溶液；

所述附子供試品溶液是取附子制品/煻灰炮附子加入氨水溶液，再加入體積比為1∶1的異丙醇-乙酸乙酯混合溶液，經超聲提取、定容、過濾，所得續濾液經濃縮后，再次加入體積比為1∶1的異丙醇-二氯甲烷混合溶液溶解，過濾制得。