[發(fā)明專利]附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210387097.0
• 申請日: 2022-04-13
• 公開（公告）號(hào): CN114965735B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉廣學(xué);侯金才;黃熙凱;鄒妍;尚明英;徐風(fēng);蔡少青
• 申請（專利權(quán)）人: 神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司;京津冀聯(lián)創(chuàng)藥物研究（北京）有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京匯智英財(cái)專利代理有限公司 11301
• 代理人: 陳雅靜

1.一種附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其特征在于，所述多元統(tǒng)計(jì)分析方法包括以下步驟：

1)利用高效液相色譜檢測附子制品及煻灰炮附子，并分別獲得附子制品及煻灰炮附子中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿共6種烏頭堿類生物堿含量；

利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測附子制品及煻灰炮附子，獲得相應(yīng)的化學(xué)色譜峰峰面積，并確認(rèn)煻灰炮附子所得化學(xué)色譜峰對(duì)應(yīng)的活性成分；

所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中附子制品及煻灰炮附子需制備相應(yīng)的附子供試品溶液；

所述附子供試品溶液是取附子制品/煻灰炮附子加入氨水溶液，再加入體積比為1:1的異丙醇-乙酸乙酯混合溶液，經(jīng)超聲提取、定容、過濾，所得續(xù)濾液經(jīng)濃縮后，再次加入體積比為1:1的異丙醇-二氯甲烷混合溶液溶解，過濾制得；

所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中色譜條件為：

流動(dòng)相A為采用濃度為0.04mol/L的乙酸銨溶液，流動(dòng)相B為乙腈；

所述乙酸銨溶液為氨水調(diào)節(jié)pH值至10的乙酸銨溶液；

采用梯度洗脫，所述梯度洗脫的洗脫條件為：

0～10min，95％→90％流動(dòng)相A，5％→10％流動(dòng)相B；

10～25min，90％→60％流動(dòng)相A，10％→40％流動(dòng)相B；

25～50min，60％→48％流動(dòng)相A，40％→52％流動(dòng)相B；

50～80min，48％→30％流動(dòng)相A，52％→70％流動(dòng)相B；

80～95min，30％→15％流動(dòng)相A，70％→85％流動(dòng)相B；

所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中色譜柱為Phenomenex?Gemini?C18色譜柱、柱溫為40℃、流速為1.0mL/min、檢測波長為240nm；

從煻灰炮附子所得的18個(gè)化學(xué)色譜峰中選取14個(gè)峰面積較大的分析色譜峰作為分析對(duì)象；選取過程中，排除33號(hào)化學(xué)色譜峰，原因是33號(hào)色譜峰雖然具有最高的峰面積，但在HPLC-IT-TOF-MSⁿ液質(zhì)分析中未得到任何母離子和碎片離子信息；

2)將測得的附子制品和煻灰炮附子中6種烏頭堿類生物堿含量、檢測附子制品和煻灰炮附子獲得的14個(gè)分析色譜峰的峰面積作為數(shù)據(jù)一并進(jìn)行主成分分析、偏最小二乘-判別分析和聚類分析，獲得分析結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其特征在于，主成分分析、偏最小二乘-判別分析和聚類分析采用軟件Metaboanalyst?4.0進(jìn)行分析；

聚類分析方法為系統(tǒng)聚類法。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中附子制品及煻灰炮附子需制備相應(yīng)的附子供試品溶液；

所述附子供試品溶液是取4重量份附子制品/煻灰炮附子加入3體積份濃度為10wt％的氨水溶液，再加入50體積份體積比為1:1的異丙醇-乙酸乙酯混合溶液，經(jīng)超聲提取、定容、過濾，再取40體積份所得續(xù)濾液濃縮后，再次加入1體積份體積比為1:1的異丙醇-二氯甲烷混合溶液溶解，過濾制得；

其中，重量份與體積份之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系為g：mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中的質(zhì)譜分析采用ESI離子源，在正負(fù)離子模式下進(jìn)行檢測。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中的質(zhì)譜條件為：

第一個(gè)質(zhì)量分析器的檢測范圍為100～1000質(zhì)荷比，離子積累時(shí)間設(shè)定為30ms；

第二個(gè)質(zhì)量分析器的檢測范圍為50～1000質(zhì)荷比，離子積累時(shí)間設(shè)定為20ms；

第三個(gè)質(zhì)量分析器的檢測范圍為50～1000質(zhì)荷比，離子積累時(shí)間設(shè)定為20ms。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的附子的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測中的質(zhì)譜條件為：

氮?dú)饬魉贋?.5L/min，CDL溫度為200℃，加熱塊的溫度為200℃，PDA的檢測波長范圍為200～700nm，正離子模式下接口電壓為4.5kV，負(fù)離子模式下接口電壓為3.5kV，正負(fù)離子模式的檢測電壓均為1.7kV，干燥氣壓設(shè)定為100kPa，最大壓力設(shè)定為30MPa。