[發明專利]一種提高叢枝菌根真菌產孢質量和效率的方法

在審

• 申請號: 202210382732.6
• 申請日: 2022-04-13
• 公開（公告）號: CN114774289A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 李曉玉;金慧群;王鵬飛;程備久;陳金;王國慶
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;A01G31/00;A01G7/00;C12R1/645
• 代理公司: 合肥中谷知識產權代理事務所(普通合伙) 34146
• 代理人: 袁錦波

本發明公開了一種提高叢枝菌根真菌產孢質量和效率的方法，屬于微生物培養領域，具體涉及一種誘導植物產生毛狀根，利用液體培養基快速擴繁，與叢枝菌根真菌接種后提高叢枝菌根真菌生長速度，改善產孢質量和效率的方法；本發明將液體MSR培養基擴繁毛狀根和接種叢枝菌根真菌技術相結合，大大提高了生產叢枝菌根真菌繁殖體的效率，簡化了操作程序，降低了染菌風險；本發明還提供了完整的毛狀根液體擴繁的方法流程，用以提高叢枝菌根真菌產孢質量和效率，對于大批量的生產擴繁叢枝菌根真菌繁殖體以及菌劑生產有重要作用。

技術領域

本發明屬于微生物培養領域，具體涉及一種提高叢枝菌根真菌產孢質量和效率的方法。

背景技術

叢枝菌根(AM)是廣泛存在于自然界植物與真菌之間的共生體系，其在絕大多數陸生植物根系皮層內定殖并形成特殊的叢枝狀結構，該共生體系可追溯到4億年前，AM真菌在植物體吸收養分的同時能夠促進植物對水分、礦物質和營養物質的吸收(Maillet et al.,2011)。

現有的叢枝菌根真菌毛狀根離體雙重培養體系的毛狀根培養多是在固體培養基上繼代，繼代效率慢，根據毛狀根的生長狀況需定期更換培養基，增加了染菌風險，產孢效率和孢子質量不高，影響了該方法在叢枝菌根真菌菌劑生產上的規?；瘧?。

發明內容

本發明的目的就在于為了解決上述問題，提供一種結構簡單，設計合理的一種提高叢枝菌根真菌產孢質量和效率的方法。

本發明通過以下技術方案來實現上述目的：

一種提高叢枝菌根真菌產孢質量和效率的方法，包括以下步驟：

(1)利用發根農桿菌誘導宿主植物產生毛狀根；

(2)篩選幼嫩的毛狀根進行除菌培養，獲得無菌的毛狀根；

(3)將無菌的毛狀根用液體MSR培養基進行液體擴繁，獲得液體擴繁的毛狀根；

(4)取部分液體擴繁的毛狀根置于固體MSR培養基上，接種叢枝菌根真菌孢子。

作為本發明的進一步優化方案，利用發根農桿菌誘導宿主植物產生毛狀根的方法為：取宿主植物進行消毒，在無菌環境下將消毒后的宿主植物切開使切面形成愈傷組織，放置在共培養培養基上，將活化后的發根農桿菌菌液滴于愈傷組織中心處，在培養箱中暗培養后用無菌水沖洗去除殘留的農桿菌，后轉移到除菌培養基上培養除菌，每隔3天轉移一次培養基，至愈傷組織上陸續產生毛狀根為止。

作為本發明的進一步優化方案，篩選幼嫩的毛狀根進行除菌培養，獲得無菌的毛狀根的方法為：當毛狀根長至3±1cm時，篩選其中幼嫩，生長迅速的根，取根段至除菌培養基上，經過數代連續培養直至除菌完成，不產生菌斑為止，然后轉移到不含抗生素和任何激素的MSR培養基上。

作為本發明的進一步優化方案，將無菌的毛狀根用液體MSR培養基進行液體擴繁，獲得液體擴繁的毛狀根的方法為：將幼嫩的毛狀根放入裝有液體MSR培養基的三角瓶中，在恒溫下培養，每隔30天更換一次液體MSR培養基。

作為本發明的進一步優化方案，取部分液體擴繁的毛狀根置于固體MSR培養基上，接種叢枝菌根真菌孢子的方法包括：

將得到的毛狀根放在固體MSR培養基上，待接種孢子；

將孢子濕篩、消毒后轉移到水瓊脂培養基上，在恒溫培養箱內進行暗培養，將符合條件的孢子在體式顯微鏡下標注好位置，在無菌條件下將上述孢子轉移到生長毛狀根的固體MSR培養基中，在25℃的恒溫培養箱內避光培養，使孢子延伸菌絲和毛狀根形成共生，獲得幼嫩孢子；

孢子的繼代培養：在無菌條件下切出含有孢子的培養基，切碎混合均勻后涂抹在生長良好的且未接種孢子的含有毛狀根的固體MSR培養基上進行繼代培養。

作為本發明的進一步優化方案，所述宿主植物為去皮胡蘿卜。