[發(fā)明專利]一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法

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• 申請日: 2022-04-13
• 公開（公告）號: CN114774289A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李曉玉;金慧群;王鵬飛;程備久;陳金;王國慶
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;A01G31/00;A01G7/00;C12R1/645
• 代理公司: 合肥中谷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 34146
• 代理人: 袁錦波

1.一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)宿主植物產(chǎn)生毛狀根；

(2)篩選幼嫩的毛狀根進(jìn)行除菌培養(yǎng)，獲得無菌的毛狀根；

(3)將無菌的毛狀根用液體MSR培養(yǎng)基進(jìn)行液體擴(kuò)繁，獲得液體擴(kuò)繁的毛狀根；

(4)取部分液體擴(kuò)繁的毛狀根置于固體MSR培養(yǎng)基上，接種叢枝菌根真菌孢子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)宿主植物產(chǎn)生毛狀根的方法為：取宿主植物進(jìn)行消毒，在無菌環(huán)境下將消毒后的宿主植物切開使切面形成愈傷組織，放置在共培養(yǎng)培養(yǎng)基上，將活化后的發(fā)根農(nóng)桿菌菌液滴于愈傷組織中心處，在培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)后用無菌水沖洗去除殘留的農(nóng)桿菌，后轉(zhuǎn)移到除菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)除菌，每隔3天轉(zhuǎn)移一次培養(yǎng)基，至愈傷組織上陸續(xù)產(chǎn)生毛狀根為止。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：篩選幼嫩的毛狀根進(jìn)行除菌培養(yǎng)，獲得無菌的毛狀根的方法為：當(dāng)毛狀根長至3±1cm時，篩選其中幼嫩，生長迅速的根，取根段至除菌培養(yǎng)基上，經(jīng)過數(shù)代連續(xù)培養(yǎng)直至除菌完成，不產(chǎn)生菌斑為止，然后轉(zhuǎn)移到不含抗生素和任何激素的MSR培養(yǎng)基上。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：將無菌的毛狀根用液體MSR培養(yǎng)基進(jìn)行液體擴(kuò)繁，獲得液體擴(kuò)繁的毛狀根的方法為：將幼嫩的毛狀根放入裝有液體MSR培養(yǎng)基的三角瓶中，在恒溫下培養(yǎng)，每隔30天更換一次液體MSR培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：取部分液體擴(kuò)繁的毛狀根置于固體MSR培養(yǎng)基上，接種叢枝菌根真菌孢子的方法包括：

將得到的毛狀根放在固體MSR培養(yǎng)基上，待接種孢子；

將孢子濕篩、消毒后轉(zhuǎn)移到水瓊脂培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)，將符合條件的孢子在體式顯微鏡下標(biāo)注好位置，在無菌條件下將上述孢子轉(zhuǎn)移到生長毛狀根的固體MSR培養(yǎng)基中，在25℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)避光培養(yǎng)，使孢子延伸菌絲和毛狀根形成共生，獲得幼嫩孢子；

孢子的繼代培養(yǎng)：在無菌條件下切出含有孢子的培養(yǎng)基，切碎混合均勻后涂抹在生長良好的且未接種孢子的含有毛狀根的固體MSR培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：所述宿主植物為去皮胡蘿卜。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高叢枝菌根真菌產(chǎn)孢質(zhì)量和效率的方法，其特征在于：所述叢枝菌根真菌孢子具體為叢枝菌根真菌異形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis，Ri)孢子。