[發(fā)明專(zhuān)利]一種豬冷凍精液的保藏方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210381511.7
• 申請(qǐng)日: 2022-04-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114651815B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝福星;武彩紅;王永娟;劉莉;邱樹(shù)磊;艾建強(qiáng);關(guān)偉偉;周春炎;陳晨
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 南京禾祁專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 32462
• 代理人: 孟捷

本發(fā)明涉及家畜人工授精技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種豬冷凍精液的保藏方法。所述保藏方法包括：將豬精液在預(yù)處理劑混合進(jìn)行預(yù)處理，得到預(yù)處理精液；在0?3℃下，將所述預(yù)處理精液與稀釋劑混合進(jìn)行稀釋?zhuān)玫较♂尵海粚⑺鱿♂尵哼M(jìn)行程序冷凍，得到冷凍精液；其中，以100g的水計(jì)，所述稀釋劑包含：5?12g的甘油、3?8g的PVA、5?12g的多聚谷氨酸、0.5?8g的乳糖、0.02?0.08g的β?半乳糖苷酶和100g的水。本發(fā)明通過(guò)特定的預(yù)處理劑結(jié)合特定的冷凍液，能夠在不影響精子細(xì)胞生命活動(dòng)能力，減少精子細(xì)胞內(nèi)以及精子細(xì)胞外自由水的含量，從而避免這部分自由水在冷凍過(guò)程中結(jié)晶，同時(shí)還可以避免這些結(jié)晶進(jìn)一步粗化、長(zhǎng)大，進(jìn)而刺破質(zhì)膜，從而保護(hù)豬精子不受損傷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及家畜人工授精技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種豬冷凍精液的保藏方法。

背景技術(shù)

目前，豬的常溫液態(tài)保存精液技術(shù)已經(jīng)被大面積地推廣和應(yīng)用到養(yǎng)豬生產(chǎn)實(shí)踐中。豬精液冷凍保存解決了精液長(zhǎng)期保存的問(wèn)題，有助于提高優(yōu)良種豬的利用率；而且極大地延長(zhǎng)了種豬基因物質(zhì)的使用壽命，使優(yōu)良種豬在短期進(jìn)行后裔測(cè)定，保留和恢復(fù)精液供應(yīng)、血統(tǒng)更新、引種、降低生產(chǎn)成本等方面均有重要意義。

由于豬精子對(duì)降溫、冷凍和解凍過(guò)程比較敏感，在豬精液冷凍過(guò)程中，稀釋液成分和冷凍保護(hù)劑的種類(lèi)及濃度、稀釋比例、冷凍速率、解凍方法等均會(huì)影響精子的活力，最終導(dǎo)致精子活力和受精能力降低，使得冷凍精液進(jìn)行人工授精效果遠(yuǎn)不如鮮精授精及自然交配。

由于豬精子在冷凍過(guò)程中精子質(zhì)膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致精子在解凍后復(fù)蘇率低，進(jìn)而導(dǎo)致母豬的受孕率降低、窩產(chǎn)仔數(shù)少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的冷凍后的豬精子活力和受精能力差的問(wèn)題，提供一種豬冷凍精液的保藏方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種一種豬冷凍精液的保藏方法，所述保藏方法包括：

將豬精液在預(yù)處理劑混合進(jìn)行預(yù)處理，得到預(yù)處理精液；

將所述預(yù)處理精液與稀釋劑混合進(jìn)行稀釋?zhuān)玫较♂尵海?/p>

將所述稀釋精液進(jìn)行程序冷凍，得到冷凍精液；

其中，以100g的水記，所述稀釋劑包含：5-12g的甘油、3-8g的PVA、5-12g的多聚谷氨酸、0.5-8g的乳糖、0.02-0.08g的β-半乳糖苷酶和100g的水。

本發(fā)明的發(fā)明發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致精子質(zhì)膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的一部分原因是因?yàn)椋蛹?xì)胞外附著的微量水分在低溫條件下會(huì)發(fā)生結(jié)晶并產(chǎn)生冰晶；冰晶刺穿精子質(zhì)膜，進(jìn)而導(dǎo)致質(zhì)膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，精子細(xì)胞內(nèi)的磷脂以及膽固醇流失，并最終影響精子活力和受精能力降低。本發(fā)明的發(fā)明人長(zhǎng)期的研究發(fā)現(xiàn)，多聚谷氨酸、乳糖和β-半乳糖苷酶反應(yīng)生成的產(chǎn)物分子中含有大量的羥基(來(lái)源于乳糖)，這些羥基能夠捕獲精子表面的水分子并形成氫鍵，一方面可以使這部分水分子不能結(jié)冰；另一方面，產(chǎn)物分子還能夠結(jié)合在冰晶核的表面，限制晶核進(jìn)一步生長(zhǎng)，減少冰晶刺破質(zhì)膜；此外，由于改產(chǎn)物能夠固定精子表面的水分子，不會(huì)導(dǎo)致精子表面水分子流失，因此，也可以減少在冷凍過(guò)程中由于細(xì)胞外水分迅速減少而導(dǎo)致的細(xì)胞脫水以及其他化學(xué)損傷等現(xiàn)象。

在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方式中，為了進(jìn)一步降低精子質(zhì)膜的損傷，優(yōu)選地，以100g的水計(jì)，所述稀釋劑包含：5-12g的甘油、3-8g的PVA、6-10g的多聚谷氨酸、0.6-3g的乳糖、0.02-0.08g的β-半乳糖苷酶和100g的水。

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，以100g的水計(jì)，所述稀釋劑還包含：22-30g的葡萄糖、4-8g的檸檬酸鈉、2-3.2g的N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸鈉、4-7g的Tris、1.5-4g的EDTA-Na₂、0.1-0.5g的半胱氨酸和20-50g的蛋黃稀釋液。