[發明專利]一種豬冷凍精液的保藏方法

有效

• 申請號: 202210381511.7
• 申請日: 2022-04-12
• 公開（公告）號: CN114651815B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 郝福星;武彩紅;王永娟;劉莉;邱樹磊;艾建強;關偉偉;周春炎;陳晨
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務所(普通合伙) 32462
• 代理人: 孟捷

1.一種豬冷凍精液的保藏方法，其特征在于，所述保藏方法包括：

將豬精液在預處理劑中混合進行預處理，得到預處理精液；

將所述預處理精液與稀釋劑混合進行稀釋，得到稀釋精液；

將所述稀釋精液進行程序冷凍，得到冷凍精液；

其中，以100g的水計，所述稀釋劑包含：5-12g的甘油、4-6g的PVA、6-10g的多聚谷氨酸、0.6-3g的乳糖、0.02-0.08g的β-半乳糖苷酶和100g的水、22-30g的葡萄糖、4-8g的檸檬酸鈉、2-3.2g的N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸鈉、4-7g的Tris、1.5-4g的EDTA-Na₂、0.1-0.5g的半胱氨酸和20-50g的蛋黃稀釋液；

所述預處理劑包含：2-5g的氯化鈉，3-8mM的氨基酸，0.1-0.5g的磷酸肌酸和100g的水；

所述多聚谷氨酸的分子量為7萬-10萬。

2.根據權利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述方法還包含稀釋劑的制備，其中，制備所述稀釋劑的方法包括：

將多聚谷氨酸、乳糖以及β-半乳糖苷酶在水中混合后，在20-40℃下反應5-40h，pH為3-5，然后加入葡萄糖、檸檬酸鈉、N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸鈉、Tris、EDTA-Na2、半胱氨酸、蛋黃稀釋液混合均勻，得到所述稀釋劑。

3.根據權利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述乳糖與所述多聚谷氨酸的重量比為1:1-10。

4.根據權利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述PVA的分子量為20000-220000。

5.根據權利要求1所述的保藏方法，其特征在于，所述預處理包括：在18-22℃下，將所述豬精液放置在所述預處理劑中靜置0.2-2h，然后進行離心，除去上清液，得到預處理精液。

6.根據權利要求5所述的保藏方法，其特征在于，所述豬精液預所述預處理劑的體積比為1:3-8。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的保藏方法，其特征在于，所述程序冷凍的方法包括：將所述稀釋精液以1-2℃/?min的速率降溫至0℃至-5℃，并保溫10-30min，然后放入液氮中降溫至-196℃。