[發明專利]一種穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑的制備方法

在審

• 申請號: 202210378712.1
• 申請日: 2022-04-12
• 公開（公告）號: CN115960051A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 王瑋;李珂珂;李宇孟;潘黎東
• 申請（專利權）人: 譜同生物醫藥科技（常州）有限公司
• 主分類號: C07D239/42
• 分類號: C07D239/42;C07B59/00;G01N33/02;G01N1/28
• 代理公司: 鹽城高創知識產權代理事務所(普通合伙) 32429
• 代理人: 陳民

本發明涉及一種食品安全檢測用穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑的制備方法，屬于食品安全檢測用標準物質研發領域。本發明的穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑的制備方法，采用市售可得的中間體及穩定同位素標記鹵代苯為原料，經一步Buchwald?Hartwig交叉偶聯反應直接得到穩定同位素標記嘧霉胺。本發明方法所使用的原料簡單易得且價格低廉、避免使用有毒刺激性原料、合成步驟短、反應條件溫和、反應收率高；最終產品副產物少、易于分離提純、化學純度高、同位素豐度不稀釋。最終產物穩定同位素標記嘧霉胺化學純度大于98％，同位素豐度大于98％。本制備方法制得的穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑能滿足食品安全檢測用液相色譜串聯質譜法所需穩定同位素標記內標試劑的技術要求。

技術領域

本發明涉及一種食品安全檢測用穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑的制備方法，屬于食品安全檢測用標準物質研發領域。

背景技術

嘧霉胺(Pyrimethanil，Cas?No.:53112-28-0)是由法國安萬特公司研發，20世紀末投入使用的一種苯氨基嘧啶類新型內吸性殺菌劑，其作用機理獨特，能通過抑制病菌浸染酶的產生從而阻止病菌的侵染并殺死病菌,具有葉片穿透、根部內吸活性，對葡萄、草莓、番茄、黃瓜、洋蔥、茄子及觀賞植物等的灰霉病具有優異防治效果。近年來，嘧霉胺在蔬菜、茶葉等植物源性食品生產中使用量不斷增加，由于其直接噴灑在農作物上，通過食用進入人體，其殘留量過大不可避免的對人體健康造成危害。美國、日本和歐盟等已相繼對蔬菜中嘧霉胺的最高殘留量做了限量規定，歐盟也于2014年起對進口茶葉正式實施新農殘限量標準，其中把嘧霉胺的殘留限量規定為0.05ppm。我國也在《GB?2763-2021食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量》中規定了嘧霉胺在各類食品中最高殘留限量。同時，我國檢測該物質的相關標準有《GB?23200.121-2021食品安全國家標準植物源性食品中331種農藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質譜聯用法》、《GB?23200.13-2016食品安全國家標準茶葉中448種農藥及相關化學品殘留量的測定液相色譜-質譜法》等。

因國內無相對應的穩定同位素標記內標化合物供應，而國外產品進口價格昂貴、供貨周期長且供應不穩定，目前上述檢測標準都采用外標法來進行定量檢測。穩定同位素稀釋質譜法是國際上公認的痕量檢測的“金標準”，能夠顯著的降低基質效應，提高檢測結果的精確度，使用該化合物對應的穩定同位素標記的化合物作為內標使用內標法來進行檢測定量會顯著提高檢測結果的準確性，降低該化合物的檢出限。因此，研制穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑對于我國食品安全監督檢測工作相關領域具有重要意義。

目前，現有技術中該天然豐度的化合物合成文獻有很多，例如路線一：授權中國發明專利“一種嘧霉胺的制備方法”(CN?102816122?B)、“一種高純度嘧霉胺的制備方法及用于制備高純度嘧霉胺的設備”(CN?10461016?B)、國際專利“METHOD?FOR?PRODUCING(4,6-DIMETHYLPYRIMIDINE-2-YL)-PHENYLAMINE(PYRIMETHANIL)”(WO2011067362(A1))中均是以苯胺、鹽酸、單氰胺、碳酸鈉為原料進行加成成鹽反應，合成苯基胍碳酸鹽，最后與乙酰丙酮進行環合反應制得嘧霉胺。

路線二：周艷麗，薛超.殺菌劑嘧霉胺的合成研究[J].農藥科學與管理，2005，26(9)：24-25.中報道的嘧霉胺的合成方法是以硝酸胍、乙酰丙酮、碳酸鉀為原料先合成2-氨基-4，6-二甲基嘧啶，然后再與亞硝酸鈉和稀鹽酸進行重氮化反應得到2-氯-4，6-二甲基嘧啶，最后與苯胺加成得到嘧霉胺。

上述路線一中采用的原料單氰胺有毒，極刺激腐蝕皮膚、呼吸道、粘膜；路線二中苯胺的化學當量接近2當量，此兩條路線均不適合用來合成穩定同位素標記嘧霉胺內標試劑。

截至目前，穩定同位素標記的嘧霉胺內標試劑的合成路線及工藝均無文獻報道。