[發明專利]一種基于ZNF334基因的檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202210375058.9
• 申請日: 2022-07-11
• 公開（公告）號: CN114990213A
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 向廷秀;孫冉;程兆博
• 申請（專利權）人: 重慶大學附屬腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 重慶市嘉允啟行專利代理事務所(普通合伙) 50243
• 代理人: 胡柯

本發明公開了一種基于ZNF334基因的檢測試劑盒及應用，所述檢測試劑盒包含ZNF334基因的甲基化檢測試劑及常規試劑，所述ZNF334基因的甲基化檢測試劑對ZNF334基因在實體腫瘤中的甲基化水平進行檢測，特異性甲基化引物對可以與ZNF334基因DNA甲基化位點序列特異性結合，靈敏、快速、準確地檢測ZNF334的甲基化水平。利用本發明的試劑盒，可以在實體腫瘤的一種或多種本中檢測ZNF334的甲基化狀態，為實體腫瘤的診斷、風險預測、預后判斷提供依據，效率高、成本低。

技術領域

本發明屬于生物醫學診斷技術領域，具體涉及一種基于ZNF334基因的檢測試劑盒及應用。

背景技術

癌癥是嚴重威脅人類生存和社會發展的重大疾病，是21世紀最嚴重的公共個衛生問題之一。我國居民的癌癥發病率總體呈現上升趨勢。在我國，最常見的腫瘤為肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌和乳腺癌。

結腸癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤之一，發病率和腫瘤相關死亡率在各類惡性腫瘤中均位居第三。早期發現，早期診斷，早期治療是提高結腸癌治療效果的最有效方法。由于結腸癌早期無特異性臨床表現且缺乏高靈敏度和特異性的早期診斷技術，大部分患者確診時已是癌癥晚期，術后5年存活率極低(低于20％)。而乳腺癌是女性最常見的惡心腫瘤之一，近年來發病率逐年增高，但近30年來乳腺癌死亡率并未明顯增加。這說明通過開展乳腺癌篩查及早診早治工作，及治療效果的提高，可以逐步降低乳腺癌對女性健康的威脅。

腫瘤早期診斷通常取決于兩個關鍵因素：檢查指標的高度特異敏感和檢測方法的無創易行。糞便隱血檢測和鋇劑灌腸氣鋇雙重造影是當前結腸癌篩查最為廣泛的方法，但由于各自技術限制，特異性差、漏診率高。電子結腸鏡檢查是結腸癌診斷的金標準，但屬于侵入性操作，不適宜早期篩查。而現行結腸癌篩查應用的經典腫瘤標志物如CEA、CA199特異性及敏感性較差。常見的乳腺癌篩查方法包括：X線檢查、超聲檢查等，但靈敏度和特異度均有待提高。因此，亟需尋找及開發出經濟簡便、高靈敏度特異度的分子標志物進行腫瘤癌的早期篩查和診斷。

近年來，DNA甲基化在結腸癌中的研究取得較大進展，為實體腫瘤的早期診斷、風險評估、預后判斷和干預治療提供了新的思路和靶點。以往的研究主要側重于探索單個抑癌基因的甲基化狀態與腫瘤癌臨床病理學指標的相關性，以及其在實體腫瘤發生發展中的作用和機制，驗證這些基因可否作為實體腫瘤早期診斷或預測預后的分子標志物。目前已經通過獨立研究證實的具有較高甲基化頻率的基因包括：APC、SEPT9、SFRP1/2、RASSF1A、MGMT和WIF1等。

隨著分子生物學和分子檢測技術的發展，使用一些高通量的甲基化檢測方法可以實現同時檢測多個甲基化位點，但不同的高通量方法檢測的甲基化位點各不相同，結果的重復性較差。并且大多數研究只是檢測腫瘤中基因的甲基化情況，缺少正常對照，無法評價其作為診斷指標的敏感性和特異性。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于ZNF334基因的檢測試劑盒及其在輔助診斷待測個體是否患有癌或預測待測個體是否具有患癌風險或判斷待測個體的癌預后情況中的應用。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種基于ZNF334基因的檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包含ZNF334基因的甲基化檢測試劑及常規試劑；

所述常規試劑包括有聚合酶、PCR反應緩沖液、dNTPs、去離子水、DNA修飾試劑；

所述ZNF334基因的甲基化檢測試劑包含用于檢測ZNF334基因表達的特異性引物對、用于檢測ZNF334基因啟動子甲基化狀態的特異性引物對、用于檢測ZNF334基因啟動子非甲基化狀態的特異性引物對、用于提取樣本DNA的提取試劑；

所述用于檢測ZNF334基因表達的特異性引物對的序列如下：

上游引物序列為5’-GTCTCTGTGGGGTATCATGT-3’，如SEQ ID No.1所示；