[發明專利]一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基及培養方法

在審

• 申請號: 202210374437.6
• 申請日: 2022-04-11
• 公開（公告）號: CN114591903A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 王建波;劉韜;王長亮;李利利;翁平
• 申請（專利權）人: 江蘇育瑞康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 深圳市廣諾專利代理事務所(普通合伙) 44611
• 代理人: 張曉璐

本發明提供一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基及培養方法，步驟一：選取胎盤絨毛膜干細胞作為培養CD106陽性細胞的初始細胞；步驟二：通過配置上述的一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基，將胎盤絨毛膜干細胞置于上述培養基進行表達培養，在培養過程中使得胎盤絨毛膜干細胞始終處于CD106表達狀態，并使得胎盤絨毛膜干細胞CD106表達比例持續增加。從胎盤組織中提取絨毛膜層細胞，CD106初始表達較高，CD106更容易高表達，研發的無血清定向培養基，使每批次細胞增殖效率高及CD106表達穩定，減少CD106表達的波動性，使臨床使用成為可能。在使用前24小時加入TNF?α及IFN?γ進一步促進CD106表達，固定CD0106陽性細胞的抑炎狀態，使其在體內不會變為促炎狀態。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，具體為一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基及培養方法。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem/stromal cells，MSCs)具有造血支持和免疫調節的獨特屬性，并且在體外可定向誘導向成脂、成骨和成軟骨分化，因此在組織修復和多系統疾病治療中具有良好的應用前景。CD106，又稱為血管細胞黏附分子-1(vascularcelladhesion molecule-1，VCAM-1)，作為一種跨膜糖蛋白，CD106的表達主要與免疫應答調節和促血管新生功能相關。多種組織來源的MSCs均含有較低比例的CD106陽性細胞，例如骨髓、臍帶、羊膜、脂肪、胎盤絨毛膜等。同時，在再生障礙性貧血骨髓來源的MSCs中，CD106含量異常低，存在多種生物學功能缺陷，尤其是免疫抑制功能顯著降低。研究發現，高活性CD106陽性MSCs具有較強的免疫調節和促血管新生能力。因此，有效提高CD106在MSCs的表達豐度，將會使MSCs具有更強的免疫調節和促血管新生能力。

目前與CD106陽性細胞相關專利有CN202010112051.9《一種提高從人臍帶間充質干細胞純化CD106陽性亞群比例的方法》此專利采用先培養再從中獲取分離出CD106陽性細胞，實際并未促進CD106陰性細胞表達CD106，只是維持CD106細胞存活狀態并從中挑選出CD106陽性細胞，在普通的培養基中CD106陽性細胞比例只能維持現狀甚至降低。

CN201910348027.2《一種可提高臍帶間充質干細胞CD106和CD54亞群比例的培養基》此專利CD106表達波動較大,CD106表達在20～86％之間，TNF-α使用濃度范圍較大，且含有胎牛血清，難以實際應用。

CN202010409889.4《一種制備CD106高表達間充質干細胞的方法、間充質干細胞及其應用和定向培養基》由臍帶間充質干細胞經細胞因子刺激轉變，刺激程度較大，CD106表達不夠高，且含有胎牛血清，容易造成批間不穩定。

發明內容

本發明目的在于提供一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基及培養方法。

為達成上述目的，本發明提出如下技術方案：一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基，包含90～95％的DMEM/12、5-10％血清替代物，并添加堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、表皮細胞生長因子(EGF)、地塞米松和白介素10(IL10)。

優選的，所述地塞米松的用量為10^-10～10^-11mol/L，EGF的用量為10～40ng/ml，bFGF的用量為5～15ng/ml，IL10的用量為20～60ng/ml。

優選的，包括如下步驟：

步驟一：選取胎盤絨毛膜干細胞作為培養CD106陽性細胞的初始細胞；

步驟二：通過配置上述的一種促進間充質干細胞穩定表達CD106陽性細胞的培養基，將胎盤絨毛膜干細胞置于上述培養基進行表達培養，在培養過程中使得胎盤絨毛膜干細胞始終處于CD106表達的狀態，并使得胎盤絨毛膜干細胞CD106表達比例持續增加，最終達到CD-106表達高于85％的狀態。