[發(fā)明專利]一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210370683.4
• 申請日: 2022-04-11
• 公開（公告）號: CN114457198B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王羲笛;王宏華;張勇;童超;陳智林;辛瑞祥;劉磊;王小彩;翟坤龍
• 申請（專利權(quán)）人: 濰坊華卓生物科技有限公司;濰坊吉因生物科技有限公司;貝南生物科技（廈門）有限公司;濰坊華英生物科技有限公司;昌樂縣寶都街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 威海恒譽潤達專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37260
• 代理人: 戚笑頤

本發(fā)明提供了一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒及檢測方法，其解決了現(xiàn)有的甲型流感病毒及多分型檢測手段存在檢測時間長、靈敏度低、操作步驟繁瑣且易發(fā)生交叉污染的技術(shù)問題，檢測試劑盒包含F(xiàn)luA/H579反應(yīng)試劑，F(xiàn)luA/H579反應(yīng)試劑包含甲型流感病毒及H5、H7、H9分型特異性引物、甲型流感病毒及H5、H7、H9探針、緩沖液、酶混合液和凍干保護劑。本發(fā)明同時提供與甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒聯(lián)合的多重?zé)晒釶CR檢測方法。本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于生物信息檢測技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請屬于生物信息檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，是涉及一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

經(jīng)過改革開放30多年的持續(xù)發(fā)展，雞肉已成為我國第二大肉類生產(chǎn)和消費品，肉雞產(chǎn)業(yè)已成為我國農(nóng)村經(jīng)濟的支柱產(chǎn)業(yè)。然而，禽流感疫情是肉雞乃至禽類面臨的最大威脅。2004年首例禽流感在我國大陸暴發(fā)以來，我國禽類因禽流感的發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)至少是362736羽和391501羽。

禽流感是由Ａ型流感病毒引起的一種禽類的感染性疾病。禽流感病毒根據(jù)表面血凝素蛋白和神經(jīng)氨酸酶的不同，可以分為不同亞型，目前發(fā)現(xiàn)有18種HA亞型和11種NA亞型。按病原體的類型，禽流感可分為高致病性、低致病性和非致病性三大類。非致病性和低致病性禽流感的致死率較低；而高致病性禽流感由A型的H5、H7及H9亞型流感病毒引起，占我國發(fā)生禽流感次數(shù)的90%以上。

現(xiàn)階段對禽流感的檢測，主要通過臨床癥狀、分離培養(yǎng)、免疫檢測及PCR-電泳法等常規(guī)手段進行診斷及病原體排查。分離培養(yǎng)耗時耗力，需要嚴格的實驗室環(huán)境、通常需要3天才能確診；而免疫檢測靈敏度低，且存在“窗口期”，感染后3-7天才能檢測出相應(yīng)的抗原或抗體；而PCR-電泳法則需要在PCR擴增結(jié)束后通過瓊脂糖凝膠電泳的方法來進行結(jié)果判斷，操作步驟繁瑣，檢測靈敏度不高且容易造成樣本間的交叉污染以及實驗環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明就是為了解決上述背景技術(shù)的不足，提供了一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒及檢測方法。本發(fā)明的檢測試劑盒聯(lián)合多重?zé)晒釶CR檢測方法，能對禽類病料樣本及環(huán)境等樣本中的病原體核酸進行檢測，判斷其禽類是否感染甲型流感病毒，且對高致病性甲型流感中的H5/H7/H9三個分型進行快速準確區(qū)分。

為此，本發(fā)明提供了一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，包含F(xiàn)luA/H579反應(yīng)試劑，所述FluA/H579反應(yīng)試劑包含甲型流感病毒及H5/H7/H9分型特異性引物、甲型流感病毒及H5/H7/H9探針、緩沖液、酶混合液和凍干保護劑，所述甲型流感病毒及H5、H7、H9分型特異性引物包括上游引物和下游引物，甲型流感病毒上游引物序列如SEQID NO:1所示，甲型流感病毒下游引物序列如SEQID NO:2所示，甲型流感探針序列如SEQID NO:3所示；H5分型上游引物序列如SEQID NO:4所示，H5分型下游引物序列如SEQID NO:5所示，H5探針序列如SEQID NO:6所示；H7分型上游引物序列如SEQID NO:7所示，H7分型下游引物序列如SEQIDNO:8所示，H7探針序列如SEQID NO:9所示；H9分型上游引物序列如SEQID NO:10所示，H9分型下游引物序列如SEQID NO:11所示，H9探針序列如SEQID NO:12所示。

優(yōu)選的，甲型流感病毒及H5、H7、H9探針 5'端包括 FAM、HEX、ROX或CY5 的熒光報告基團，3'端包括 BHQ1或BHQ2 的熒光淬滅基團。

優(yōu)選的，所述檢測試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品，所述陽性對照品包含甲型流感病毒質(zhì)粒、H5分型質(zhì)粒、H7分型質(zhì)粒、H9分型質(zhì)粒及凍干保護劑，所述陰性對照品為TE水。

優(yōu)選的，甲型流感病毒及H5、H7、H9分型上下游引物濃度均為600nmol/L，甲型流感病毒及H5、H7、H9探針濃度為150nmol/L。

優(yōu)選的，所述酶混合液包含5UHS-Taq酶和2.5U M-MLV酶。