[發(fā)明專利]一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒及檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210370683.4 | 申請日： | 2022-04-11 |
| 公開（公告）號： | CN114457198B | 公開（公告）日： | 2022-07-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王羲笛;王宏華;張勇;童超;陳智林;辛瑞祥;劉磊;王小彩;翟坤龍 | 申請（專利權(quán)）人： | 濰坊華卓生物科技有限公司;濰坊吉因生物科技有限公司;貝南生物科技（廈門）有限公司;濰坊華英生物科技有限公司;昌樂縣寶都街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 威海恒譽(yù)潤達(dá)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37260 | 代理人： | 戚笑頤 |
| 地址： | 261100 山東省濰坊市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)北*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 流感病毒 多分型 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，其特征在于，包含F(xiàn)luA/H579反應(yīng)試劑，所述FluA/H579反應(yīng)試劑為凍干粉狀試劑，所述FluA/H579反應(yīng)試劑包含甲型流感病毒及H5、H7、H9分型特異性引物、甲型流感病毒及H5、H7、H9探針、緩沖液、酶混合液和凍干保護(hù)劑，所述甲型流感病毒及H5、H7、H9分型特異性引物包括上游引物和下游引物，甲型流感病毒上游引物序列如SEQID NO:1所示，甲型流感病毒下游引物序列如SEQID NO:2所示，甲型流感探針序列如SEQID NO:3所示；H5分型上游引物序列如SEQID NO:4所示，H5分型下游引物序列如SEQID NO:5所示，
H5探針序列如SEQID NO:6所示；H7分型上游引物序列如SEQID NO:7所示，H7分型下游引物序列如SEQID NO:8所示，H7探針序列如SEQID NO:9所示；H9分型上游引物序列如SEQIDNO:10所示，H9分型下游引物序列如SEQID NO:11所示，H9探針序列如SEQID NO:12所示，甲型流感病毒及H5、H7、H9探針 5'端包括 FAM、HEX、ROX或CY5 的熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端包括BHQ1或BHQ2的熒光淬滅基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品，所述陽性對照品包含甲型流感病毒質(zhì)粒、H5分型質(zhì)粒、H7分型質(zhì)粒、H9分型質(zhì)粒及凍干保護(hù)劑，所述陰性對照品包含TE水，所述陽性對照品為凍干粉狀試劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，其特征在于，甲型流感病毒及H5、H7、H9分型上下游引物濃度均為600nmol/L，甲型流感病毒及H5、H7、H9探針濃度為150nmol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，其特征在于，所述酶混合液包含5UHs-Taq酶和2.5U M-MLV酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液包含30mmol/L pH為8.8的Tris，120mmol/L KCl和1%DMSO、300μmol/L dNTPs和3.5mmol/LMgCl2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑為5%甘油、2.5%蔗糖和1%甘氨酸的混合物。
7.一種利用權(quán)利要求1所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，步驟如下：
S1.對待測樣本進(jìn)行核酸提??；
S2.將甲型流感病毒及H5、H7、H9分型特異性引物、甲型流感病毒及H5、H7、H9探針、緩沖液、酶混合液和凍干保護(hù)劑混合，-20℃預(yù)凍，真空干燥，2-8℃避光保存；
S3.以甲型流感病毒質(zhì)粒、H5分型質(zhì)粒、H7分型質(zhì)粒、H9分型質(zhì)粒及凍干保護(hù)劑作為陽性對照品，-20℃預(yù)凍，真空干燥，2-8℃避光保存；以TE水作為陰性對照品；
S4. 分別使用甲型流感病毒及H5、H7、H9分型引物及探針進(jìn)行多重?zé)晒舛縋CR檢測；
S5.通過收集的熒光曲線和Ct值判定結(jié)果；
所述利用甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒的檢測方法不用于疾病診斷或治療。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的甲型流感病毒及多分型的檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增條件為：50℃逆轉(zhuǎn)錄20min，93℃預(yù)變性2min；93℃變性10s，55℃熒光收集35s，循環(huán)40次。
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