[發明專利]一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠及制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210369834.4
• 申請日: 2022-04-08
• 公開（公告）號: CN114848893A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 王秀麗;郭麗娜;顧婉鈺;李厚澤;蓋高成;王明琦
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: A61L26/00
• 分類號: A61L26/00;A61L27/22;A61L27/36;A61L27/52;C08J3/075
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

本發明公開了一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠及制備方法與應用，屬于水凝膠技術領域。一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠的制備方法，包括以下步驟：將去細胞化小腸黏膜下層消化后鹽析凍干，制成粉末后溶解，并與絲素蛋白溶液混合后超聲，即得。所述細胞外基質水凝膠可以作為皮膚損傷修復敷料和生物相容性細胞支架使用。結合絲素蛋白后，傷口愈合速度和皮膚愈合程度均得到明顯提升。

技術領域

本發明涉及一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠及制備方法與應用，屬于水凝膠技術領域。

背景技術

脫細胞化組織來源的細胞外基質水凝膠作為一種生物相容性良好的支架材料已被廣泛應用于組織工程領域。經過去細胞化處理的小腸黏膜下層主要含有Ⅰ型、Ⅲ型膠原，豐富的纖維鏈接蛋白以及生長因子等，是保護創面、促進組織愈合的理想細胞支架材料。絲素蛋白是一種從家蠶蠶絲中提取而來的天然生物材料，具有良好的生物相容性。目前臨床上，在創傷修復治療中，皮膚損傷后移植依舊存在皮源不足，免疫排斥等問題，因此尋找一種生物相容性良好、取材方便且可以批量制備的生物材料變得十分重要。

發明內容

為解決現有技術存在的問題，本發明提供了一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸粘膜下層細胞外基質水凝膠及其制備方法與應用。

本發明提供了一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠的制備方法，包括以下步驟：將去細胞化小腸黏膜下層消化后鹽析凍干，制成粉末后溶解，并與絲素蛋白溶液混合后超聲，即得。

進一步地，上述技術方案中，所述制備方法包括如下步驟：

(1)將豬去細胞化小腸黏膜下層粉末用消化液消化，離心，取上清液，調節pH至7-7.5；加鹽析出、離心若干次，保留沉淀，冷凍干燥；

(2)取干燥后的沉淀粉末，按50-100mg/ml加入0.1-0.2％(v/v)乙酸溶解，用10xDMEM調節滲透壓至生理水平；

(3)3-6％(w/v)的絲素蛋白溶液超聲，將步驟(2)所得溶液按體積比1:1-1:1.5加入超聲后的絲素蛋白溶液；

(4)將混合后的溶液超聲，接種于孔板中，孵育，即得。

進一步地，上述技術方案中，所述豬去細胞化小腸黏膜下層粉末是由豬小腸黏膜下層經脫脂，脫細胞，胃蛋白酶消化，多次鹽析離心，真空冷凍干燥，粉碎研磨后制得。

進一步地，上述技術方案中，所述脫脂為豬小腸黏膜下層在甲醇和氯仿體積比為1:1-1:1.5的溶液中避光靜置。

進一步地，上述技術方案中，所述脫細胞為將脫脂后的豬小腸黏膜下層浸泡于去離子水配制的0.04-0.06％(w/v)胰蛋白酶/0.04-0.06％(w/v)乙二胺四乙酸二鈉的溶液中，再于0.4-0.6％(w/v)SDS和生理鹽水中搖動4-5小時。

進一步地，上述技術方案中，消毒和清洗為將脫細胞后的豬小腸黏膜下層浸泡于0.1-0.2％(w/v)過氧乙酸和15-25％(v/v)乙醇中；用去離子水徹底沖洗，去除殘留的試劑，更換去離子水至搖晃無泡沫。

進一步地，上述技術方案中，步驟(1)所述消化液為胃蛋白酶消化液，所述豬去細胞化小腸黏膜下層與胃蛋白消化酶的質量比為10:1，再按10mg/ml加入3％乙酸，48-72h后，豬去細胞化小腸黏膜下層無絮狀物，呈半透明狀，離心。

本發明還提供了根據上述的制備方法制備得到的結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠。

本發明還提供了結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠在制備皮膚損傷修復敷料中的應用。

本發明還提供了結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠在制備生物相容性細胞支架中的應用。