[發明專利]一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠及制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210369834.4
• 申請日: 2022-04-08
• 公開（公告）號: CN114848893A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 王秀麗;郭麗娜;顧婉鈺;李厚澤;蓋高成;王明琦
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: A61L26/00
• 分類號: A61L26/00;A61L27/22;A61L27/36;A61L27/52;C08J3/075
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

1.一種結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：將去細胞化小腸黏膜下層消化后鹽析凍干，制成粉末后溶解，并與絲素蛋白溶液混合后超聲，即得。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將豬去細胞化小腸黏膜下層粉末用消化液消化，離心，取上清液，調節pH至7-7.5；加鹽析出、離心若干次，保留沉淀，冷凍干燥；

(2)取干燥后的沉淀粉末，按50-100mg/ml加入0.1-0.2％(v/v)乙酸溶解，用DMEM調節滲透壓至生理水平；

(3)3-6％(w/v)的絲素蛋白溶液超聲，將步驟(2)所得溶液按體積比1:1-1:1.5加入超聲后的絲素蛋白溶液；

(4)將混合后的溶液超聲，接種于孔板中，孵育，即得。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：所述豬去細胞化小腸黏膜下層粉末是由豬小腸黏膜下層經脫脂，脫細胞，胃蛋白酶消化，多次鹽析離心，真空冷凍干燥，粉碎研磨后制得。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述脫脂為豬小腸黏膜下層在甲醇和氯仿體積比為1:1-1:1.5的溶液中避光靜置。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述脫細胞為將脫脂后的豬小腸黏膜下層浸泡于去離子水配制的0.04-0.06％(w/v)胰蛋白酶/0.04-0.06％(w/v)乙二胺四乙酸二鈉的溶液中，再于0.4-0.6％(w/v)SDS和生理鹽水中搖動4-5小時。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：消毒和清洗為將脫細胞后的豬小腸黏膜下層浸泡于0.1-0.2％(w/v)過氧乙酸和15-25％(v/v)乙醇中；用去離子水徹底沖洗，去除殘留的試劑，更換去離子水至搖晃無泡沫。

7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)所述消化液為胃蛋白酶消化液，所述豬去細胞化小腸黏膜下層與胃蛋白消化酶的質量比為9:1-11:1，再按9.5-10.5mg/ml加入2.5％-3.5％(v/v)乙酸，48-72h后，豬去細胞化小腸黏膜下層無絮狀物，呈半透明狀，離心。

8.權利要求1-7中任一項所述的制備方法制備得到的結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠。

9.權利要求8所述的結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠在制備皮膚損傷修復敷料中的應用。

10.權利要求8所述結合絲素蛋白的豬去細胞化小腸黏膜下層細胞外基質水凝膠在制備生物相容性細胞支架中的應用。