[發明專利]一種非人類胚胎細胞的冷凍優化體系及應用

有效

• 申請號: 202210368421.4
• 申請日: 2022-04-06
• 公開（公告）號: CN114617121B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 張靜;常在;劉世景
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/073
• 代理公司: 北京知聯天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11594
• 代理人: 韓藝珠

1.一種非人類胚胎細胞的冷凍優化體系，其特征在于：所述冷凍優化體系包括用于胚胎細胞冷凍的載體、胚胎細胞平衡液、胚胎細胞冷凍液和胚胎細胞解凍液；所述載體為半麥管，所述半麥管的一端具有從末端向中心斜向上的凹槽，所述凹槽用于承載胚胎細胞；

所述平衡液和所述冷凍液中均含有受精液，所述受精液每毫升含有氯化鈉5.7-6.1mg；氯化鉀0.30-0.40mg；七水硫酸鎂0.04-0.06mg；磷酸二氫鉀0.045-0.065mg；氯化鈣0.45-0.75mg；碳酸氫鈉30-35mg；葡萄糖0.4-0.6mg；乳酸鈉0.25-0.45mL；丙酮酸鈉0.025-0.050mg；0.5-1.5％雙抗；牛血清白蛋白3.0-6.0mg；

所述平衡液包括血清15-25％、受精液60-70％、丙二醇/DMSO?6.0-8.5％、和乙二醇6.0-8.5％；

所述冷凍液包括血清15-25％、受精液30-35％、丙二醇/DMSO12-17％、乙二醇12-17％和蔗糖0.15-0.25g/mL；

所述解凍液包括第一解凍液、第二解凍液、第三解凍液，所述第一解凍液、第二解凍液包括血清、受精液和蔗糖，所述第三解凍液包括血清和受精液；

所述解凍液包括第一解凍液、第二解凍液、第三解凍液，所述第一解凍液、第二解凍液包括血清、受精液和蔗糖，所述第三解凍液包括血清和受精液；

在所述第一解凍液、第二解凍液、第三解凍液中，所述受精液濃度逐漸遞增，所述蔗糖濃度逐漸遞減；

在所述第一解凍液、第二解凍液、第三解凍液中，所述受精液濃度逐漸遞增，所述蔗糖濃度逐漸遞減。

2.根據權利要求1所述的冷凍優化體系，其特征在于：所述第三解凍液不包括蔗糖。

3.一種利用權利要求1或2所述的冷凍優化體系對非人類胚胎細胞的冷凍優化方法，其特征在于：所述冷凍優化方法包括：

步驟1，將所述胚胎細胞置于平衡液中進行預處理，使所述胚胎細胞恢復正常形態；

步驟2，將經過步驟1處理后的胚胎細胞置于冷凍液中進行洗滌，然后用載體承載胚胎細胞，置于液氮中保存；

步驟3，將經過步驟2保存的胚胎細胞置于解凍液中解凍，使胚胎細胞復蘇。

4.根據權利要求3所述的冷凍優化方法，其特征在于：所述步驟2中所述洗滌時間小于等于1分鐘。

5.根據權利要求3或4所述的冷凍優化方法，其特征在于：所述步驟3包括將凍存的胚胎細胞依次經過第一解凍液、第二解凍液和第三解凍液處理。

6.根據權利要求5所述的冷凍優化方法，其特征在于：所述胚胎細胞在所述第二解凍液中的時間小于等于5分鐘，所述胚胎細胞在所述第三解凍液中的時間小于等于10分鐘。

7.權利要求1或2所述的冷凍優化體系或者權利要求3-6中任一所述的冷凍優化方法在非人類胚胎保種中的應用。