[發明專利]一株內生球毛殼菌MG2及其在防治蘋果樹腐爛病的應用

有效

• 申請號: 202210362681.0
• 申請日: 2022-04-08
• 公開（公告）號: CN114774287B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 馮浩;渠非;黃麗麗;賀艷婷;蘇曉州
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12Q1/04;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6869;A01N63/30;A01P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 西安長和專利代理有限公司 61227
• 代理人: 黃偉洪

1.一種內生球毛殼菌MG2，其特征在于，所述內生球毛殼菌MG2(Chaetomium?globosum)已保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為：CGMCC?No.40070。

2.一種實施如權利要求1所述內生球毛殼菌MG2的內生球毛殼菌MG2的鑒定方法，其特征在于，所述內生球毛殼菌MG2的鑒定方法包括以下步驟：

步驟一，形態學觀察：進行重新活化培養后的拮抗菌株MG2特征的觀察；

步驟二，分子生物學鑒定：PCR擴增后構建多基因系統發育進化樹。

3.如權利要求2所述內生球毛殼菌MG2的鑒定方法，其特征在于，所述步驟一中的形態學觀察包括：

將平板對峙篩選得到的拮抗菌株MG2重新活化接于PDA培養基上，25℃培養箱中黑暗培養7d，觀察生長速度、菌落顏色、形狀以及閉囊殼形態特征；

其中，所述PDA培養基的制備方法為：稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊雙蒸水煮沸至可戳散，四層紗布過濾煮沸液至1L的量杯，加入20g葡萄糖和15g瓊脂攪拌均勻后雙蒸水定容至1L，封口121℃高壓滅菌20min待用。

4.如權利要求2所述內生球毛殼菌MG2的鑒定方法，其特征在于，所述步驟二中的分子生物學鑒定包括：

將拮抗菌株MG2活化接于PDA培養基上，25℃培養箱中黑暗培養4d后轉接到鋪有玻璃紙的PDA培養基中，待菌落近似長滿皿后，刮取菌絲提取菌株DNA，擴增ITS、LSU和EF-1α片段，將剩余PCR擴增產物進行測序；將測序結果序列與NCBI數據庫中相關菌株進行BLAST比對分析，分別獲得與拮抗菌株序列同源性高的相關菌株的ITS、LSU和EF-1α序列；依次載入PhyloSuite軟件中串聯，在MEGA軟件中基于鄰接法構建多基因系統發育進化樹。

5.如權利要求3所述內生球毛殼菌MG2的鑒定方法，其特征在于，所述菌株活化及平板對峙試驗包括：

菌株活化：在超凈工作臺中于4℃小斜面試管中挑少量菌絲，接種于PDA培養基上，25℃培養2～3d，完成活化；

平板對峙：采用兩點對峙法明確球毛殼菌對蘋果樹腐爛病菌的拮抗作用；在PDA平板中央放置直徑為5mm已活化的腐爛病菌菌餅，在距離病原菌菌餅左右各2.5cm處放置內生球毛殼菌菌餅，以單獨放置病原菌菌餅的處理為對照；由于球毛殼菌生長速度比腐爛病菌慢，設置處理為優先接種球毛殼菌2d，1d，0d，分別標記為處理A、B、C，每個處理3個重復；25℃黑暗培養，待對照近乎長滿皿后，測量對照組菌落直徑和處理組病原菌菌落朝球毛殼菌方向擴展的直徑，按如下公式計算抑菌率：

抑菌率＝[(對照菌落直徑-病原菌菌落朝球毛殼菌方向擴展的直徑)/對照菌落直徑]×100％。

6.一種如權利要求1所述內生球毛殼菌MG2在制備蘋果樹腐爛病防治用藥物中的應用。

7.一種鑒定如權利要求6所述內生球毛殼菌MG2在制備蘋果樹腐爛病防治用藥物中應用的方法，其特征在于，所述鑒定內生球毛殼菌MG2在制備蘋果樹腐爛病防治用藥物中應用的方法包括：

(1)鑒定球毛殼菌對蘋果樹腐爛病菌菌絲形態的影響；

(2)球毛殼菌對蘋果離體枝條和葉片的致病性檢測；

(3)確定球毛殼菌發酵液對蘋果樹腐爛病菌的抑制作用；

(4)鑒定球毛殼菌發酵液對蘋果樹腐爛病菌菌絲形態的影響；

(5)鑒定球毛殼菌發酵液對蘋果樹腐爛病菌孢子萌發的影響。