[發(fā)明專利]piRNA作為診斷標志物在法醫(yī)鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間中的應用

在審

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• 申請日: 2022-04-07
• 公開（公告）號: CN114736956A
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設計）人: 周鵬;方晨;左柏伊;嚴江偉;郭藝琳;王瑞祺;李敏;孟德萍;孫文平;劉敏
• 申請（專利權）人: 山東第一醫(yī)科大學（山東省醫(yī)學科學院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6851;G06N5/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

本發(fā)明提供了piRNA作為診斷標志物在法醫(yī)鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間中的應用，屬于法醫(yī)學鑒定技術領域；piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736。本發(fā)明的piRNA適用于急性心梗的鑒別，兩種piRNA在心梗初期表達量就發(fā)生顯著變化，因此能夠應用本發(fā)明的piRNA實現(xiàn)對心梗急性或超急性期進行鑒定。此外，rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736還可以用于急性心梗持續(xù)時間的推斷，對心梗4h內的個體進行心梗時間推斷，誤差在0.5h內，彌補了以往急性心梗時間難以推斷的難題。

技術領域

本發(fā)明屬于法醫(yī)學鑒定技術領域，具體涉及piRNA作為診斷標志物在法醫(yī)鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間中的應用。

背景技術

急性心梗(acute myocardial infarction，AMI)是心源性猝死的主要原因，且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。對于AMI的急性期和超急性期，難以通過傳統(tǒng)的病理形態(tài)學方法進行鑒別，因此急性心梗的鑒定是目前法醫(yī)病理學鑒定的難點。

piRNA(Piwi-interacting RNA)是一類長約24～32nt的單鏈非編碼RNA，作為重要的轉錄因子參與生命活動的調控，在心肌組織中表達豐度較高，具有應用于AMI鑒別的潛在價值。它具有以下優(yōu)勢：在人類基因組中已鑒定出超過3萬種的piRNA，數(shù)量遠多于其他非編碼RNA；在多種組織器官中高豐度表達，具有組織特異性；在不同發(fā)育時期和不同疾病狀態(tài)下也表現(xiàn)出時間和空間特異性；piRNA的5’端具有強烈的單磷酸尿嘧啶核苷酸傾向性， 3’端(2′-O-methyl)進行了甲基化修飾，使其具有相對較強的穩(wěn)定性。近年來已有多項研究表明piRNA參與心血管疾病的調控，Min Li等研究發(fā)現(xiàn)piRNA 參與心肌分化，K.ShanmughaRajan1等研究發(fā)現(xiàn)了與心肌肥大相關的 piRNA。

目前，還沒有關于將piRNA有作為心肌梗死鑒定標記物的報道。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供piRNA作為診斷標志物在法醫(yī)鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間中的應用。

本發(fā)明提供了piRNA作為診斷標志物在法醫(yī)鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間中的應用；所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno ＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發(fā)明還提供了piRNA作為診斷標志物在制備鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間的試劑或試劑盒中的應用；所述piRNA包括rno＿piR ＿003035和rno＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

優(yōu)選的，所述急性心梗包括發(fā)病5min～4h內的急性心梗。

優(yōu)選的，所述piRNA在急性心梗大鼠心肌組織中的表達水平上調。

本發(fā)明還提供了一種用于鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間的引物組，所述引物組包括第一引物和第二引物；

所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第二引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本發(fā)明還提供了一種用于鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續(xù)發(fā)病時間的試劑盒，包括上述方案所述的引物組和miRcute增強型miRNA熒光定量檢測用試劑。

本發(fā)明還提供了一種用于法醫(yī)鑒定急性心梗的方法，包括以下步驟：

1)分別提取待檢心肌組織和正常心肌組織的piRNA，分別反轉錄得到待檢心肌組織的cDNA和正常心肌組織的piRNA；