[發明專利]piRNA作為診斷標志物在法醫鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續發病時間中的應用

在審

• 申請號: 202210362217.1
• 申請日: 2022-04-07
• 公開（公告）號: CN114736956A
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 周鵬;方晨;左柏伊;嚴江偉;郭藝琳;王瑞祺;李敏;孟德萍;孫文平;劉敏
• 申請（專利權）人: 山東第一醫科大學（山東省醫學科學院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6851;G06N5/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

1.piRNA作為診斷標志物在法醫鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續發病時間中的應用；所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.piRNA作為診斷標志物在制備鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續發病時間的試劑或試劑盒中的應用；所述piRNA包括rno＿piR＿003035和rno＿piR＿005736；所述rno＿piR＿003035的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述rno＿piR＿005736的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述急性心梗包括發病5min～4h內的急性心梗。

4.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述piRNA在急性心梗大鼠心肌組織中的表達水平上調。

5.一種用于鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續發病時間的引物組，所述引物組包括第一引物和第二引物；

所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第二引物的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。

6.一種用于鑒定急性心梗和/或推斷急性心梗持續發病時間的試劑盒，包括權利要求5所述的引物組和miRcute增強型miRNA熒光定量檢測用試劑。

7.一種用于法醫鑒定急性心梗的方法，包括以下步驟：

1)分別提取待檢心肌組織和正常心肌組織的piRNA，分別反轉錄得到待檢心肌組織的cDNA和正常心肌組織的piRNA；

2)分別以所述待檢心肌組織的cDNA和正常心肌組織的piRNA為模板，利用權利要求5所述的引物組分別進行熒光定量PCR擴增，分別計算待檢心肌組織和正常心肌組織的rno-piR-005736和rno-piR-003035的Ct值；

若待檢心肌組織相對于正常心肌組織的rno_piR_005736表達水平上升2.38倍及以上、且piRNA-003035的表達水平上升2.14倍及以上，則判定發生急性心梗；否則，沒有發生急性心梗。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟2)中所述熒光定量PCR擴增的擴增體系以20μl計，包括以下組分：10μL2×miRcute Plus miRNA PreMix、0.4μL上游引物、0.4μL下游引物、2μL cDNA和7.2μL ddH₂O；

所述熒光定量PCR擴增的程序為：95℃、15min；94℃、20sec，64℃、30sec，72℃、34sec，5個循環；94℃、20sec，60℃、34sec，40個循環。

9.一種用于推斷急性心梗持續發病時間的模型的構建方法，包括以下步驟：

測定不同急性心梗持續發病時間的心肌組織的rno-piR-005736和rno-piR-003035的表達量；

以不同急性心梗持續發病時間的rno-piR-005736和rno-piR-003035的表達量為自變量、以急性心梗持續發病時間為因變量，使用隨機森林模型建立得到急性心梗持續時間推斷模型。

10.一種法醫推斷急性心梗持續發病時間的方法，包括以下步驟：

測定待檢心肌組織的rno-piR-005736和rno-piR-003035的表達量，導入權利要求9所述構建方法構建得到的急性心梗持續時間推斷模型，輸出急性心梗持續發病時間。