[發(fā)明專利]一種抗BXMAS1嵌合抗原受體及其修飾的免疫細(xì)胞及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210361858.5
• 申請日: 2022-04-07
• 公開（公告）號: CN114644716A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 儲劍虹;吳德沛;徐楊;蔣東鵬;秦慧敏;朱婷婷;易玲
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 周敏

本發(fā)明提供一種抗BXMAS1嵌合抗原受體及其修飾的免疫細(xì)胞及應(yīng)用，所述的抗BXMAS1嵌合抗原受體包括信號肽、能與腫瘤表面抗原BXMAS1結(jié)合的抗原識別區(qū)結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)、CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的抗BXMAS1嵌合抗原受體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性高，能特異性識別BXMAS1表面抗原，攜帶該嵌合抗原受體的免疫細(xì)胞可應(yīng)用于治療表達(dá)BXMAS1抗原的腫瘤，并且具有較好的安全性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物基因領(lǐng)域，具體涉及一種抗BXMAS1嵌合抗原受體及其修飾的免疫細(xì)胞及應(yīng)用。

背景技術(shù)

嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor，CAR)介導(dǎo)的T細(xì)胞(CAR-T)療法被認(rèn)為是目前最有望攻克惡性血液系統(tǒng)腫瘤的治療手段之一。CAR-T療法是通過基因工程的手段將靶向腫瘤表面抗原的嵌合抗原受體導(dǎo)入患者自體或健康供者來源的T細(xì)胞內(nèi)，從而賦予T細(xì)胞以人類白細(xì)胞抗原(HLA)非依賴性的形式識別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。過繼輸注的CAR-T能在患者體內(nèi)存活相當(dāng)長的時間并維持免疫記憶功能，從而發(fā)揮持久的抗腫瘤效應(yīng)并行使免疫監(jiān)視作用，因而被譽(yù)為“活體藥物”。相比于傳統(tǒng)的放、化療導(dǎo)致的機(jī)體免疫功能受損，病情較易復(fù)發(fā)，以及腫瘤細(xì)胞易產(chǎn)生耐藥等缺點(diǎn)，CAR-T療法的毒副作用相對較小且可控，同時抗腫瘤療效更持久。

多發(fā)性骨髓瘤是一種臨床常見的嚴(yán)重威脅人類健康的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，而B細(xì)胞成熟性抗原(BCMA)是目前應(yīng)用最廣泛的針對該疾病的CAR-T療法的靶標(biāo)抗原。靶向BCMA的CAR-T療法在一系列治療難治復(fù)發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤患者的臨床實(shí)驗中取得了令人矚目的治療效果，已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)上市。然而，研究也發(fā)現(xiàn)BCMA作為多發(fā)性骨髓瘤CAR-T療法的靶標(biāo)有一些局限性。首先，一部分多發(fā)性骨髓瘤患者腫瘤細(xì)胞本身的BCMA抗原表達(dá)水平就很低，無法被BCMA CAR-T所識別，因而不適用BCMA CAR-T療法；其次，有很多患者在早期對BCMACAR-T治療有一定的反應(yīng)性，后期卻因發(fā)生BCMA抗原表達(dá)下降或者丟失引起的免疫逃逸而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)，針對這類復(fù)發(fā)患者需要采用針對其他靶標(biāo)的CAR-T治療。基于這些原因，我們?nèi)匀恍枰綄ぐ邢蚱渌乖腃AR-T療法以應(yīng)對患者腫瘤細(xì)胞原發(fā)性低表達(dá)BCMA的問題以及BCMA抗原丟失引起的抗原逃逸和復(fù)發(fā)。

BXMAS1是Fc受體樣基因家族成員之一，在染色體上定位于1q21，其編碼的蛋白質(zhì)與FcγR1具同源性，胞外有9個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)有免疫受體酪氨酸抑制性基序結(jié)構(gòu)域。與BCMA相類似，它在正常細(xì)胞的表達(dá)局限于小部分B細(xì)胞和漿細(xì)胞表面。BXMAS1在多發(fā)性骨髓瘤患者的腫瘤細(xì)胞表面高度表達(dá)，而且在復(fù)發(fā)難治性患者的腫瘤細(xì)胞表面仍然維持高度表達(dá)，因而有望成為CAR-T療法治療B細(xì)胞惡性腫瘤的一個潛在的分子靶點(diǎn)。已有文獻(xiàn)報道靶向BXMAS1的雙特異性抗體在體外培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞以及荷瘤小鼠中表現(xiàn)出明顯的抗骨髓瘤效應(yīng)，同時在食蟹猴中的安全性評價顯示其具有較好的安全性，僅對正常B細(xì)胞和漿細(xì)胞有損傷。值得指出的是，抗體類藥物的半衰期較短因而無法發(fā)揮持續(xù)長久的抗腫瘤療效，相比較而言，CAR-T能在體內(nèi)長期存續(xù)及擴(kuò)增從而發(fā)揮更持久的抗腫瘤效應(yīng)，而且目前的技術(shù)水平已能有效監(jiān)視和控制CAR-T引起的不良反應(yīng)如細(xì)胞因子釋放綜合征等，因此采用CAR-T的手段靶向腫瘤細(xì)胞表面的BXMAS1可能更具有前景。

盡管CAR-T所依賴的抗原識別功能結(jié)構(gòu)域大多來源于特異性靶向靶標(biāo)抗原的單克隆抗體的scFv(由單克隆抗體的重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL的編碼序列通過Linker連接起來)，然而并不是所有識別靶標(biāo)抗原的scFv都能用來構(gòu)建CAR的表達(dá)載體。CAR只能識別腫瘤細(xì)胞膜抗原，因而首先要求所使用的scFv必須能識別腫瘤抗原的胞外結(jié)構(gòu)域。另一方面，并不是所有針對靶標(biāo)抗原細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的scFv都能作為CAR的抗原識別部分。研究表明有多個與scFv相關(guān)的因素(對靶標(biāo)抗原識別的特異性、親和力以及所識別的抗原表位與細(xì)胞膜之間的距離等)會對CAR-T細(xì)胞的效應(yīng)功能產(chǎn)生很大的影響，甚至?xí)?dǎo)致CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)嚴(yán)重受損。因此，篩選及鑒定出針對特定靶標(biāo)抗原的適合的scFv對研發(fā)出功能完備的CAR-T細(xì)胞同樣至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容