[發明專利]用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法在審
| 申請號： | 202210361708.4 | 申請日： | 2022-04-07 |
| 公開（公告）號： | CN114574424A | 公開（公告）日： | 2022-06-03 |
| 發明（設計）人： | 劉永軍;柯俐;代平禮;陳夏桑 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蜜蜂研究所 |
| 主分類號： | C12N5/07 | 分類號： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立軍 |
| 地址： | 100093 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 單細胞 蜜蜂 大腦 制備 方法 | ||
1.一種用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
向蜜蜂大腦組織中加入蛋白酶溶液，充分分解后，獲得蜜蜂大腦組織混合物；
所述蜜蜂大腦組織混合物經過濾后，收集大腦組織混合物濾液；
將所述大腦組織混合物離心后，獲得沉淀物，將所述沉淀物重懸后，離心，獲得的沉淀用緩沖液重懸，獲得蜜蜂大腦單細胞懸液；
其中，所述蛋白酶溶液中含liberse TM酶和木瓜酶。
2.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述蛋白酶溶液中，liberse TM酶的濃度為12-14U/ml。
3.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述蛋白酶溶液中，木瓜酶的濃度為3-5mg/ml。
4.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述重懸液為含質量百分數為9-11％％FBS的DMEM培養基。
5.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述過濾采用40μm細胞篩過濾。
6.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述大腦組織混合物離心條件為：4℃，300RCF，離心10min。
7.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述蜜蜂大腦組織的分解條件為37℃水浴，10-30min，冷卻至室溫，同時上下顛倒蜜蜂大腦組織混合物。
8.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述蜜蜂大腦組織分解前，先經PBS溶液清洗2-5次。
9.如權利要求1所述的用于單細胞測序的蜜蜂大腦單細胞懸液的制備方法，其特征在于，
所述緩沖液為質量分數為0.03-0.05％BSA的PBS溶液。
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