[發(fā)明專利]一種復(fù)雜食品中酸性染料的快速提取凈化方法及檢測方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210358774.6
• 申請(qǐng)日: 2022-04-07
• 公開（公告）號(hào): CN114894918B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雙;陳樹兵;方科益;賈江鋼;張益
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波海關(guān)技術(shù)中心
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理有限公司 33226
• 代理人: 何仲

1.一種復(fù)雜食品中酸性染料的快速提取凈化方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)稱取待測樣品按質(zhì)量體積比1g：2mL的比例加入水-甲醇-氯仿混合提取液，震蕩5min，以4500r/min離心5min，得到溶液及殘?jiān)瑢堅(jiān)貜?fù)提取一次，其中所述的水-甲醇-氯仿混合提取液中水、甲醇和氯仿的體積比為1:2:1，所述的待測樣品為火鍋底料、辣椒醬或蛋黃醬；

(2)合并提取溶液加入到與混合提取液相同體積的氯仿水溶液，以4500r/min離心5min，得到上層水相和下層有機(jī)相，其中所述的氯仿水溶液中氯仿和水的體積比為1:1；

(3)取上層水相，加入氯化鈉，震蕩5min，以4500r/min離心5min，得到上層甲醇層和下層水層，其中所述的氯化鈉的添加量為待測樣品質(zhì)量的40％；

(4)取上層甲醇層，氮吹至2.0ml，用甲醇定容至2.0ml，過濾膜，待分析。

2.一種復(fù)雜食品中酸性染料的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)樣品前處理

稱取待測樣品按質(zhì)量體積比1g：2mL的比例加入水-甲醇-氯仿混合提取液，震蕩5min，以4500r/min離心5min，得到溶液及殘?jiān)瑢堅(jiān)貜?fù)提取一次；合并提取溶液加入到與混合提取液相同體積的氯仿水溶液，以4500r/min離心5min，得到上層水相和下層有機(jī)相；取上層水相，加入氯化鈉，震蕩5min，以4500r/min離心5min，得到上層甲醇層和下層水層；取上層甲醇層，氮吹至2.0ml，用甲醇定容至2.0ml，過濾膜，待分析，其中所述的水-甲醇-氯仿混合提取液中水、甲醇和氯仿的體積比為1:2:1；所述的氯仿水溶液中氯仿和水的體積比為1:1；所述的氯化鈉的添加量為待測樣品質(zhì)量的40％，所述的待測樣品為火鍋底料、辣椒醬或蛋黃醬；

(2)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液組成和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

A.混合標(biāo)準(zhǔn)溶液組成

酸性染料類包括：酸性綠16，酸性藍(lán)7，酸性金黃G，酸性藍(lán)9，酸性黃17，酸性藍(lán)3，酸性紅52，酸性橙20，橙黃II，酸性紅18，酸性藍(lán)1，甲基橙，藏花橙G，酸性藍(lán)113，酸性橙Ⅳ，酸性紅1，酸性紫43，橙G，酸性藍(lán)74，酸性紅27，酸性藍(lán)1，酸性紅73，酸性紅87，酸性紅51，酸性紅26，酸性藍(lán)90，直接藍(lán)86，直接藍(lán)6，酸性橙3，鉻藍(lán)SE，直接黑38，活性艷藍(lán)KN-R，考馬斯亮藍(lán)R250，酸性藍(lán)41，檸檬黃，新紅，靛藍(lán)，胭脂紅，誘惑紅，日落黃，亮藍(lán)，直接黃4，酸性綠5，食品綠3，酸性媒介黑T，酸性紅B，酸性黃11，酸性黃2，酸性黃73，酸性黃79，酸性黃151，酸性藍(lán)62，酸性黑1，酸性黑24，酸性橙56，酸性橙6，酸性紅9，酸性紅94，酸性紫43，酸性綠73，酸性棕282，將標(biāo)準(zhǔn)品分別稱取適量，用水溶解后，采用甲醇稀釋至10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；

B.基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量：

在空白樣品中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度范圍：0ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，以濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為縱坐標(biāo)，配制混合標(biāo)準(zhǔn)曲線，作為目標(biāo)物定量的依據(jù)；

(3)色譜及質(zhì)譜條件

A.液相條件：色譜柱HypersilGold?C18，流動(dòng)相A：含5mM甲酸銨的甲醇-水溶液，其中甲醇-水溶液中甲醇與水的體積比為5:95，流動(dòng)相B：含5mM甲酸銨的甲醇-水溶液其中甲醇-水溶液中甲醇與水的體積比為95:5，流速:0.3mL/min，進(jìn)樣量:5.0μL，梯度見下表1:

表1正、負(fù)離子模式HPLC洗脫程序

B.質(zhì)譜條件：質(zhì)譜在負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描測定，質(zhì)量范圍：m/z?100-1000，分辨率70,000，自動(dòng)增益控制目標(biāo)值5e5；負(fù)離子模式2800V，離子傳輸管溫度為320℃，鞘氣35L/h，輔助氣15L/h，氣化室溫度380℃；MS采集時(shí)間為0.0-20.0min，源內(nèi)裂解電壓為40eV，最大注入時(shí)長為250ms，在樣品運(yùn)行前對(duì)儀器分別進(jìn)行正、負(fù)離子校正，二級(jí)采用自動(dòng)觸發(fā)模式，分辨率35,000FWHM，自動(dòng)增益控制目標(biāo)值5.0e5，相對(duì)碰撞能量范圍10-40％，保留時(shí)間窗口根據(jù)目標(biāo)物RT±1.0min；

(4)濃度計(jì)算方法

樣品中待測物的含量根據(jù)如下計(jì)算公式(1)得到：X＝2*C*V/m，式中：

X－試樣中待測物含量，單位為μg/kg；

C－試樣處理液中待測物濃度，根據(jù)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到，單位為μg/L；

V—定容體積，單位為mL；

m－試樣質(zhì)量，單位為g。