[發明專利]一種苦瓜凍干粉及其中皂苷和黃酮的結構推測方法

在審

• 申請號: 202210355949.8
• 申請日: 2022-04-06
• 公開（公告）號: CN114907435A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 吳茂玉;宋燁;和法濤;葛邦國;馬曉燕
• 申請（專利權）人: 中華全國供銷合作總社濟南果品研究所
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00;C07J71/00;C07H1/08;A61P3/10;C07H15/26;G01N21/78;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 濟南千慧專利事務所(普通合伙企業) 37232
• 代理人: 秦嘉

1.一種苦瓜凍干粉，其中含有皂苷和黃酮，其特征在于，所述皂苷為皂苷L和皂苷F₂，所述黃酮為山奈酚-4＇-O-葡萄糖苷；

所述皂苷L的結構式為：

所述皂苷F₂的結構式為：

所述山奈酚-4＇-O-葡萄糖苷的結構式為：

2.一種如權利要求1所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，具體步驟為：

將樣品先經過高效液相色譜分離，將分離后的樣品進行一級質譜分析，推測苦瓜樣品中皂苷和黃酮的種類，通過多級質譜檢測驗證皂苷和黃酮的種類，確定從苦瓜凍干粉中分離出來的兩種皂苷分別是皂苷L和皂苷F₂，從苦瓜凍干粉中分離出來的一種黃酮是山奈酚-4＇-O-葡萄糖苷。

3.根據權利要求2所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，質譜條件為：

噴霧壓力2-5KV，鞘氣壓力30-40arb，輔助氣壓力1-20arb，毛細管溫度260-400℃，加熱溫度200-400℃，掃描范圍m/z100-1000。

4.根據權利要求2所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，高效液相色譜條件為：

色譜柱：Hyper Gold C18，

柱溫：25℃，

流動相：0.1％甲酸水/乙腈，

掃描波長范圍：200-600nm，

流速0.4mL/min，

進樣量5μL。

5.根據權利要求4所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，皂苷的梯度洗脫程序為：

0-15min，10-80％乙腈；15-18min，80％乙腈；18-18.1min，80-10％乙腈；18.1-21min，10％乙腈；

黃酮的梯度洗脫程序為：

0-5min，10-60％乙腈；5-18min，60-80％乙腈；18-19min，80-95％乙腈；19-22min，95％乙腈；22-22.1min，95-10％乙腈；22.1-25min，10％乙腈。

6.根據權利要求2所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，包括樣品原料進行檢測之前的分離步驟：

(1)苦瓜皂苷的分離：

取適量苦瓜凍干粉，依次經過超聲提取、萃取、減壓濃縮和真空干燥得到苦瓜總皂苷粗品，再經XAD-2大孔樹脂洗脫，得到苦瓜皂苷純品；

(2)苦瓜黃酮的分離：

取適量苦瓜凍干粉，回流提取，得到黃酮粗品，采用聚酸胺粉對黃酮粗品溶解液吸附后，轉入層析柱，依次經過苯洗和甲醇洗，得到黃酮純品。

7.根據權利要求6所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，采用香草醛-高氯酸比色法分別測定步驟(1)中苦瓜總皂苷粗品和苦瓜皂苷純品的含量；

采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法分別測定步驟(2)中黃酮粗品和黃酮純品的含量。

8.根據權利要求6所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，所述苦瓜凍干粉通過如下方法制備得到：

將苦瓜汁經果汁酶酶解，酶解液經陶瓷膜超濾處理，超濾液濃縮，可溶性固形物達到24Brix，再經真空冷凍干燥即得所述苦瓜凍干粉。

9.根據權利要求2-8任一項所述的苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮的結構推測方法，其特征在于，包括以α-糖苷酶為藥理活性研究的模型，考察苦瓜凍干粉中皂苷和黃酮對α-葡萄糖苷酶的活性抑制的步驟；

黃酮和皂苷對α-葡萄糖苷酶活性的抑制率分別達到20％-30％和40％-50％。