[發明專利]一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法

在審

• 申請號: 202210339046.0
• 申請日: 2022-04-01
• 公開（公告）號: CN114606225A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 石涵;龔偉;高伙妮
• 申請（專利權）人: 上海睿璟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京匯眾通達知識產權代理事務所(普通合伙) 11622
• 代理人: 尹全杰

本發明公開了基因組DNA提取技術領域的一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法，其特征在于：所述提取方法是基于磁珠法提取人類基因組DNA，去除抑制性物質殘留，獲取高純度的DNA，口腔拭子樣本通過在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化，將DNA釋放到裂解液中；加入獨特的結合磁珠使其與DNA特異性結合，在75％乙醇溶液洗滌中將該體系中的蛋白質和其余雜質去除，留下磁珠上結合的DNA，最后DNA在水溶液或低鹽緩沖液中進行洗脫，得到的DNA可用于后續實驗，本發明具有樣本獲取方便、提取過程無毒無害、提取操作簡單、操作時間短和可用于自動化提取等特點。

技術領域

本發明涉及基因組DNA提取技術領域的一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法。

背景技術

基因組DNA提取是當前分子擴增和檢測領域中基本的實驗操作之一，口腔黏膜為復層鱗狀上皮，由多層細胞組成，基底層具有旺盛的分裂能力，其上皮脫落的細胞與其他組織細胞一樣具有完整的基因組DNA，可成為法醫學和遺傳學DNA多態性檢測分型的生物性檢驗材料；口腔黏膜代謝旺盛，容易脫落，口腔拭子(口腔脫落細胞)采樣方法是一種簡單、無痛、無創的DNA樣本采集方法，該方法適用于采集任何年齡段人群的DNA樣本，也適用新生兒、嬰幼兒或老弱病殘者等不便采血人群。

傳統從口腔拭子中提取DNA多采用酚氯仿法或者Chelex-100等方法，存在酚氯仿污染或DNA得率低，純度差等缺點；采用柱提法存在操作繁瑣和用時長等缺點。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法，以解決目前傳統方法中采用酚氯仿、Chelex-100、柱提法等方法從口腔拭子中提取DNA過程中存在酚氯仿污染、DNA得率低、純度差或者操作繁瑣、用時長等的問題。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法，其特征在于：所述提取方法是基于磁珠法提取人類基因組DNA，去除抑制性物質殘留，獲取高純度的DNA，提取方法包括以下步驟：

1)采樣

在面頰內擦拭過的拭子或者棉簽轉置于1.5mL的離心管中，將拭子剪下或者使其脫落，加入300μL裂解液，震蕩混勻離心，將200μL液體轉移至新的1.5mL離心管中；

2)加10μL蛋白酶K，吹打混勻，56℃，800rpm，孵育30min；

3)室溫放置5min后，12000rpm離心2min；

4)將200μL上清轉移至含100μL結合磁珠的1.5mL離心管中；

5)渦旋混勻，室溫靜置孵育5min，短離，將離心管置于磁力架上至溶液澄清；

6)移除上清，向離心管中加入500μL 75％乙醇溶液，在Vortex渦旋混勻儀器劇烈混合，混勻后再將離心管放回磁力架上靜置30S；

7)重復步驟6一次；

8)使用移液器移除底部殘留乙醇溶液；

9)室溫靜置2-5min，至磁珠不反光；

10)加入50μL的Nuclease free water/低鹽緩沖液，把離心管從磁力架取下，重懸磁珠，室溫靜置5min；

11)將離心管置于磁力架上2min；

12)用移液器吸取上清液，取出下面的DNA溶液轉移到新的1.5ml離心管中；

對上述技術方案做進一步的說明：

所述裂解液組成成分為：

鹽酸胍，20-100mM；