[發(fā)明專利]一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210339046.0 | 申請(qǐng)日： | 2022-04-01 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN114606225A | 公開（公告）日： | 2022-06-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 石涵;龔偉;高伙妮 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海睿璟生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京匯眾通達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11622 | 代理人： | 尹全杰 |
| 地址： | 201112 上海*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 磁珠法 口腔 人類基因組 dna 提取 方法 | ||
1.一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法，其特征在于：所述提取方法是基于磁珠法提取人類基因組DNA，去除抑制性物質(zhì)殘留，獲取高純度的DNA，包括以下步驟：
1)采樣
在面頰內(nèi)擦拭過的拭子或者棉簽轉(zhuǎn)置于1.5mL的離心管中，將拭子剪下或者使其脫落，加入300μL裂解液，震蕩混勻離心，將200μL液體轉(zhuǎn)移至新的1.5mL離心管中；
2)加10μL蛋白酶K，吹打混勻，56℃，800rpm，孵育30min；
3)室溫放置5min后，12000rpm離心2min；
4)將200μL上清轉(zhuǎn)移至含100μL結(jié)合磁珠的1.5mL離心管中；
5)渦旋混勻，室溫靜置孵育5min，短離，將離心管置于磁力架上至溶液澄清；
6)移除上清，向離心管中加入500μL 75％乙醇溶液，在Vortex渦旋混勻儀器劇烈混合，混勻后再將離心管放回磁力架上靜置30S；
7)重復(fù)步驟6一次；
8)使用移液器移除底部殘留乙醇溶液；
9)室溫靜置2-5min，至磁珠不反光；
10)加入50μL的Nuclease free water/低鹽緩沖液，把離心管從磁力架取下，重懸磁珠，室溫靜置5min；
11)將離心管置于磁力架上2min；
12)用移液器吸取上清液，取出下面的DNA溶液轉(zhuǎn)移到新的1.5ml離心管中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法，其特征在于：所述裂解液組成成分為：鹽酸胍，20-100mM；
Tris緩沖溶液pH8.0，10-50mM；
KCl溶液50-250mM；
EDTA螯合劑pH8.0，10-100mM；
SDS親水基表面活性劑0.1％-1％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磁珠法的口腔拭子人類基因組DNA提取方法，其特征在于：所述結(jié)合磁珠組成成分為：
GE磁珠100-500μL；
聚乙二醇1-5g；
KCl溶液1-4mM；
Tris緩沖溶液PH8.0，5-25mM。
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