[發明專利]一種法夫酵母代謝產物的分析方法

在審

• 申請號: 202210330532.6
• 申請日: 2022-03-30
• 公開（公告）號: CN114720618A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 李志朋;楊亮;李清彪;楊昊翌;姜澤東;倪輝;朱艷冰;杜希萍;鄭明靜
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 王鳳玲

本發明公開了一種法夫酵母代謝產物的分析方法，其包括以下步驟：從法夫酵母發酵液中提取代謝物作為樣品；對樣品進行液相色譜?電噴霧電離?三重四級桿飛行時間質譜聯用檢測，獲得質譜數據；在MS?Dial選擇液質代謝組學數據庫進行下載；通過MS?Dial對上述步驟的質譜數據進行分析，獲得總離子峰圖；將上述步驟的總離子峰圖與上述步驟的數據庫進行鑒定法夫酵母的代謝產物。該方法提高了檢測靶向性的準確度，提高了檢測靈敏度，無需同位素示蹤，操作簡單，適用性廣泛。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種法夫酵母代謝產物的分析方法。

背景技術

法夫酵母是Phaffia屬的微生物，是一種極其重要的工業菌株，能夠合成多種具備生物活性的天然產物。法夫酵母所產蝦青素、脂肪酸、巖藻黃質、葉黃素等在食品保健、醫療、美容等方面具有較高的利用價值。

代謝物的定性一直是代謝組學的一大難點，由于法夫酵母代謝物復雜，傳統微生物代謝數據庫樣本較少，導致法夫酵母代謝物定性不準確以及假陽性較高。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提出一種法夫酵母代謝產物的分析方法，該方法提高了檢測的靶向性，克服了一般方法分析定性不精準的缺點，提高了檢測靈敏度，無需同位素示蹤，操作簡單，適用性廣泛。

為了實現上述目的，本發明的實施例在一方面提出了一種法夫酵母代謝產物的分析方法，其包括以下步驟：

(1)從法夫酵母發酵液中提取代謝物作為樣品；

(2)對樣品進行液相色譜-電噴霧電離-三重四級桿飛行時間質譜聯用檢測，獲得質譜數據；

(3)在MS-Dial選擇液質代謝組學數據庫進行下載；

(4)通過MS-Dial對步驟(2)的質譜數據進行分析，獲得總離子峰圖；

(5)將步驟(4)的總離子峰圖與步驟(3)的數據庫進行鑒定法夫酵母代謝產物。

根據本發明實施例的一種法夫酵母代謝產物的分析方法，該方法使用LC-Qtof-MS液質聯用技術進行質譜，再將質譜數據轉入MS-Dial軟件，選擇All public MS/MS數據庫對數據，通過質譜數據與數據庫匹配進行分析，提高了檢測的靶向性，克服了一般方法分析定性不精準的缺點；同時根據特異子離子的豐度對代謝物進行定量檢測，極大提高了檢測靈敏度，為研究法夫酵母天然活性代謝產物提供新思路新方法。

另外，根據本發明上述實施例提出的一種法夫酵母代謝產物的分析方法，還可以具有如下附加的技術特征：

可選地，步驟(5)中，通過總離子峰圖中的質譜峰和保留時間與數據庫進行匹配鑒定法夫酵母代謝產物。

可選地，步驟(2)中，液相色譜的操作條件是：進樣量5～10μL，柱溫25～35℃，流速0.2～0.4mL/min；色譜流動相A：0.1％甲酸水，B：乙腈；色譜梯度洗脫程序如下：0～1min，90％A；1～3min，A從90％線性變化至50％；3～6min，A從50％線性變化至10％；6～9min，A維持在10％；9～11min，A從10％線性變化至50％；11～12min，A從50％線性變化至90％。

可選地，步驟(2)中，電噴霧電離是采用正離子模式和負離子模式進行檢測。

可選地，步驟(2)中，ESI源條件為：毛細管電壓：3～3.30kV；采樣錐：40；震源偏移：80；源溫度：100℃；脫溶劑溫度：250～300℃；氣簾氣流量：50L/H；脫溶劑氣流量：59850L/H；正離子掃描m/范圍：50～1200Da；負離子掃描m/z范圍：50～1200Da。

可選地，還包括步驟(6)使用L-谷氨酸、咪唑、葡萄糖、蔗糖標準品對儀器和軟件校準。