[發明專利]一種具有長連接臂的NTA色譜介質及其制備方法

有效

• 申請號: 202210320697.5
• 申請日: 2022-03-29
• 公開（公告）號: CN114797804B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 滕以剛;杜君瑤
• 申請（專利權）人: 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: B01J20/28
• 分類號: B01J20/28;B01J20/30;B01D15/20;B01D15/38
• 代理公司: 蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276
• 代理人: 朱華慶

本發明提供一種具有長間隔臂的NTA層析介質，其特征在于：該介質具有如式(1)所示的結構：并公開了其制備方法和應用。本發明的新型色譜介質，具有更長的間隔臂，對于某些因蛋白構象而難以結合的His標簽蛋白具有更好的純化效果。

技術領域

本發明專利涉及一種具有長連接臂的NTA色譜介質及其制備方法。

背景技術

His標簽蛋白純化是目前最為常用的純化手段之一，固定化的Ni²⁺、Co²⁺、Cu²⁺或Zn²⁺與重組蛋白的6-10個連續的組氨酸標簽結合，從而達到分離目的蛋白與其他蛋白的目的。固定化金屬的介質目前主要有IDA、NTA、TED幾種，介質的活化方式為環氧活化，介質與活性分子之間的連接臂為4個原子。有部分重組蛋白因為本身構象原因，His標簽不能完全結合在介質上，導致目的蛋白純化量低、雜蛋白較多。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有長連接臂的NTA親和層析介質，可以降低蛋白本身構象的影響，達到更優的純化效果。

本發明采用的技術方案為：一種具有長連接臂的NTA親和層析介質，其特征在于：該介質具有如式(1)所示的結構：

其中G是固相支持介質；

n為6-10中任一整數。

優選的，所述固相支持介質為多孔固相支持物或磁性介質。

優選的，所述固相支持介質為瓊脂糖、葡聚糖、硅膠或磁珠。

優選的，所述固相支持介質直徑為20-200μm，由瓊脂糖制成，n1為2，n2為0或1，R1為H，R2為COOH。更優選的直徑為45-160μm。

優選的，所述固相支持介質在使用時螯合有金屬離子，所述金屬離子為Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺或Co²⁺。更優選的方案為Ni²⁺。

本發明還公開了上述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質的制備方法，其特征在于其步驟包括：

(1)活化固相支持介質，在固相支持介質表面連接環氧基團；

(2)環氧活化的介質與同時含有氨基和羧基的分子反應，制得羧基介質；

(3)步驟(2)的產物通過縮合劑與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和/或N-羥基硫代琥珀酰亞胺(sulfo-NHS)偶連；

(4)NHS和/或sulfo-NHS活化的羧基介質與N,N-雙(羧甲基)-L-賴氨酸偶連形成長間隔臂的NTA介質；

(5)用氨基乙醇封閉NTA介質中未完全偶連的活性基團；

(6)NTA介質螯合金屬離子，得到NTA親和層析介質。

優選的，步驟(1)在堿性條件下進行，用環氧氯丙烷或環氧溴丙烷進行環氧活化。

優選的，步驟(2)中同時含氨基和羧基的分子，為氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸、氨基己酸、氨基庚酸、氨基辛酸的任意一種或多種的混合物。

優選的，步驟(6)中用NTA介質與Ni²⁺、Co²⁺、Cu²⁺或Zn²⁺的可溶性鹽反應，以螯合金屬離子。

本發明還公開了上述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質在純化含有His標簽的重組蛋白中的應用。

優選的，所述重組蛋白帶有6-10個His標簽。