[發(fā)明專利]一種具有長連接臂的NTA色譜介質(zhì)及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210320697.5
• 申請日: 2022-03-29
• 公開（公告）號: CN114797804B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 滕以剛;杜君瑤
• 申請（專利權(quán)）人: 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: B01J20/28
• 分類號: B01J20/28;B01J20/30;B01D15/20;B01D15/38
• 代理公司: 蘇州根號專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32276
• 代理人: 朱華慶

1.一種具有長間隔臂的NTA親和層析介質(zhì)，其特征在于：該介質(zhì)具有如式(1)所示的結(jié)構(gòu)：

其中G是固相支持介質(zhì)；

n為6-10之間的整數(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質(zhì)，其特征在于：所述固相支持介質(zhì)為多孔固相支持物或磁性介質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質(zhì)，其特征在于：所述固相支持介質(zhì)為瓊脂糖、硅膠、葡聚糖或磁珠。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質(zhì)，其特征在于：所述固相支持介質(zhì)螯合有金屬離子，所述金屬離子為Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺或Co²⁺。

5.權(quán)利要求1-4中任一項所述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質(zhì)的制備方法，其特征在于其步驟包括：

(1)活化固相支持介質(zhì)，在固相支持介質(zhì)表面連接環(huán)氧基團；

(2)環(huán)氧活化的介質(zhì)與同時含有氨基和羧基的分子反應(yīng)，制得羧基介質(zhì)；

(3)步驟(2)的產(chǎn)物通過縮合劑與NHS和/或sulfo-NHS偶連；

(4)NHS和/或sulfo-NHS活化的羧基介質(zhì)與N,N-雙(羧甲基)-L-賴氨酸偶連形成長間隔臂的NTA介質(zhì)；

(5)用氨基乙醇封閉NTA介質(zhì)中未完全偶連的活性基團；

(6)NTA介質(zhì)螯合金屬離子，得到NTA親和層析介質(zhì)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)在堿性條件下進行，用環(huán)氧氯丙烷或環(huán)氧溴丙烷進行環(huán)氧活化。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中同時含氨基和羧基的分子，為氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸、氨基己酸、氨基庚酸、氨基辛酸的任意一種或多種的混合物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于：步驟(6)中用NTA介質(zhì)與Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺或Co²⁺的可溶性鹽反應(yīng)，以螯合金屬離子。

9.權(quán)利要求1-4中任一項所述的具有長間隔臂的NTA親和層析介質(zhì)在純化含有His標(biāo)簽的重組蛋白中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于：所述重組蛋白帶有6-10個His標(biāo)簽。