[發(fā)明專利]一種酶解透明質(zhì)酸寡糖混合物的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210318062.1
• 申請(qǐng)日: 2022-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114609296A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴躍鋒;陳冰瑤;宋保平;畢延凱;秦立春;易磊;魏長(zhǎng)浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 水羊化妝品制造有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 王歡

1.一種酶解透明質(zhì)酸寡糖混合物的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

將酶解透明質(zhì)酸寡糖液體樣品滅活，離心去除大分子，取濾過(guò)液，稀釋后作為待測(cè)液；

將所述待測(cè)液采用高效液相色譜法進(jìn)行分離檢測(cè)；

所述高效液相色譜法色譜條件為：色譜柱為C18柱；流動(dòng)相A為乙腈；流動(dòng)相B為四丁基氫氧化銨-磷酸混合水溶液；四丁基氫氧化銨-磷酸的摩爾比為(5～25):(4～20)，梯度洗脫。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述四丁基氫氧化銨-磷酸混合水溶液的pH值為6.0～7.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，采用agilent Poroshell120EC-C18色譜柱(3.0×150mm，2.7μm)，柱溫為30℃，平衡時(shí)間為28～32h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為(25～50):(75～50)；

流動(dòng)相的流速為0.5mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)為雙波長(zhǎng)，分別為210nm和232nm；

進(jìn)樣量為5μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述酶解透明質(zhì)酸寡糖液體樣品選自牛睪丸型BTH酶酶解透明質(zhì)酸寡糖液體、水蛭型LHase酶酶解透明質(zhì)酸寡糖液體、細(xì)菌型MHase酶酶解透明質(zhì)酸寡糖液體、高溫加熱的透明質(zhì)酸寡糖水解液、或微生物滋生后透明質(zhì)酸寡糖液體。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述酶解透明質(zhì)酸寡糖液體由透明質(zhì)酸酶解制得；

透明質(zhì)酸寡糖的聚合度≤20。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述梯度洗脫具體為：

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述離心的轉(zhuǎn)速為7000～9000rpm，離心的時(shí)間至少為8min，離心采用5K超濾離心管。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述流動(dòng)相A使用前過(guò)0.22μm有機(jī)相膜，超聲至少12min；

所述流動(dòng)相B使用前過(guò)0.22μm水相膜，超聲至少12min。