[發明專利]一種基于PEDF/ApoE雙基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型構建方法及應用

在審

• 申請號: 202210314234.8
• 申請日: 2022-03-28
• 公開（公告）號: CN114651785A
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 蔡衛斌;李興會
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61K49/00
• 代理公司: 北京鑫瑞森知識產權代理有限公司 11961
• 代理人: 代芳

本發明公開了一種基于PEDF/ApoE雙基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型構建方法及其應用，屬于醫學技術領域。該模型采用高脂飼料誘導PEDF/ApoE雙基因敲除小鼠發生非酒精性脂肪性肝炎表型，該模型構建方法簡便，容易推廣。利用本發明提供的方法構建的小鼠模型能夠較好的模擬人類非酒精性脂肪性肝炎的病變特征，尤其具備極其強烈的肝臟炎癥反應和肝臟纖維化表型，并具有一定幾率發展為肝臟腫瘤，因此在非酒精性脂肪性肝炎等代謝性疾病的藥物研發領域，具有重要的應用前景和價值。

技術領域

本發明屬于醫學技術領域，尤其涉及一種基于PEDF/ApoE雙基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型構建方法及應用。

背景技術

非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一種無過量飲酒史，以肝細胞脂肪變性和脂質貯積為特征的臨床病理綜合征，目前已成為全球慢性肝病的主要病因。其病理變化隨病程的進展而表現有單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis，NASH)、肝纖維化，并最終發展成肝硬化和肝細胞癌。NASH是非酒精性脂肪肝的一種極端發展形式，定義為伴隨有炎癥及肝細胞損傷的脂肪變性現象的出現，其特征在于肝臟脂肪變性、炎癥、肝細胞損傷和不同程度的纖維化。據統計，目前，NAFLD的全球患病率約為25％，且以每年360萬新增病例的速度在急劇增加。其中，約有20％的NAFLD患者進展為NASH，20％的NASH患者進展為肝硬化。因此，NAFLD及NASH發病率的急劇增加已成為全球性的重大公共衛生問題。

NASH病理機制復雜，代謝異常驅動的炎癥反應仍被認為是導致NASH發生的關鍵步驟。然而，盡管關于NASH病理機制研究近年來取得較大進展，但目前尚無經美國食品藥品監督管理局(Food and Drug Administration，FDA)批準上市的用于臨床治療NASH的藥物，導致NASH患者仍面臨“無藥可治”的局面。臨床前研究中最重要的是通過動物試驗測試靶點的合理性和藥物的成藥性。因此，新藥研發成功的關鍵是選擇正確的動物模型。NASH藥物臨床不斷受挫，臨床前的動物數據難以轉化為臨床結果，說明當前的動物模型需要改進。當前的NASH動物模型均不能夠同時模擬NASH的發病特征、發病進程及各階段的病理特征。尤其值得關注的是，當前的NASH動物模型存在一個共性的問題，即炎癥反應輕微，難以誘導出嚴重的肝臟炎癥反應。嚴重的肝臟炎癥反應恰恰是NASH區別于單純性脂肪肝的顯著標志，顯然，當前的NASH動物模型不利于臨床前藥物效果的評價。因此，建立一種以嚴重的肝臟炎癥反應為顯著特征的NASH小鼠模型對于NASH的藥物研發具有重要意義。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種基于PEDF/ApoE雙基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型構建方法及應用。

采用本發明提供的構建方法所構建的NASH小鼠模型，表現出肥胖、高血脂、胰島素抵抗、高血糖、肝臟脂肪變性、肝臟炎癥反應、肝臟纖維化和一定程度的肝臟腫瘤發生等人體NASH特征，尤其是具有極其強烈的肝臟炎癥反應特征，能夠更好的模擬人類NASH的發病特征，為NASH等代謝性疾病藥物研發的臨床前研究提供了有力的工具。

本發明的目的之一在于提供一種基于PEDF/ApoE雙基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)利用PEDF敲除小鼠和ApoE敲除小鼠交配獲得PEDF/ApoE雙基因敲除小鼠；

(2)利用高脂飼料誘導PEDF/ApoE雙基因敲除小鼠，獲得非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型。

進一步的，所述所述的PEDF敲除小鼠與ApoE敲除小鼠均為C57BL/6J背景。

更進一步的，所述步驟(2)中高脂飼料的營養素質量比組成為：蛋白質26.2％、碳水化合物26.3％和脂肪34.9％。