[發明專利]一種圓錐鐵線蓮來源的香豆素合酶、基因、載體及其應用有效
| 申請號： | 202210312834.0 | 申請日： | 2022-03-28 |
| 公開（公告）號： | CN114606212B | 公開（公告）日： | 2023-06-30 |
| 發明（設計）人： | 朱瑋;陶明磊;韓昊特;田景奎;李瑤函;李守信;劉勝志 | 申請（專利權）人： | 中國科學院基礎醫學與腫瘤研究所（籌） |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 傅朝棟;張法高 |
| 地址： | 310002 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 圓錐 鐵線 來源 香豆素合酶 基因 載體 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.?一種圓錐鐵線蓮來源的香豆素合酶，其特征在于，其為由SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質。
2.?一種編碼權利要求1所述香豆素合酶的基因，其特征在于，堿基序列如SEQ?ID?NO.2所示。
3.一種重組表達載體，其特征在于，通過在表達載體中插入權利要求2所述的基因得到。
4.如權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，所述表達載體為pET28a（+）質粒。
5.一種含有權利要求3或4所述重組表達載體的大腸桿菌。
6.如權利要求5所述的大腸桿菌，其特征在于，大腸桿菌采用BL21（DE3）作為宿主菌。
7.一種生產香豆素合酶的方法，其特征在于，將權利要求6所述的大腸桿菌接種于培養基中培養過夜，使編碼所述香豆素合酶的基因表達，收集表達蛋白并純化后得到所述圓錐鐵線蓮來源的香豆素合酶。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，接種所述大腸桿菌后的培養基中加入IPTG，于18-20℃誘導表達過夜。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，收集的表達蛋白通過鎳柱純化，得到純化后的蛋白。
10.一種根據權利要求7所述方法生產的香豆素合酶在催化生成傘形花內酯中的應用。
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