[發明專利]一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法及其應用

有效

• 申請號: 202210308914.9
• 申請日: 2022-03-25
• 公開（公告）號: CN114507640B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發明（設計）人: 楊桂花;楊海霞;趙進軍
• 申請（專利權）人: 和攜科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 侯巍巍

本申請公開了一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法及其應用，涉及免疫細胞培養的技術領域，其中，一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法，使用CIK細胞培養基進行CIK細胞體外擴增，所述CIK細胞培養基包括基礎培養基和添加在基礎培養基中的第一組分和第二組分；所述第一組分包括蒲公英甾醇、菊苣酸以及五味子醇；所述第二組分可誘導PBMC細胞分化為CIK細胞，本申請具有提高CIK細胞體外擴增的細胞增殖效果以及CIK細胞的細胞毒性的效果。

技術領域

本申請涉及免疫細胞培養的技術領域，尤其是涉及一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法及其應用。

背景技術

腫瘤免疫治療指的是通過恢復機體正常的抗腫瘤免疫反應，從而控制與清除腫瘤的一種治療方法，包括單克隆抗體類免疫檢查點抑制劑、治療性抗體、癌癥疫苗、細胞治療以及小分子抑制劑等方法。

其中，細胞過繼免疫治療是腫瘤免疫療法中的一種，具有療效好、毒副作用小以及無耐藥性問題等優點；其通過體外活化或擴增得到自體或異體免疫效應細胞，接著將免疫效應細胞輸注至患者體內，免疫效應細胞在體內特異性識別并殺滅血液及組織中的癌細胞以及突變的細胞；從而達到腫瘤治療的效果。

細胞因子誘導殺傷細胞(CIK細胞)是由人體外周血單個核細胞(PBMCs)誘導產生的異質細胞群，具有殺瘤效果，是腫瘤過繼細胞免疫療法中首選的細胞。CIK細胞不僅對腫瘤細胞有殺傷作用，而且能夠增強患者的免疫功能，增強患者的免疫力。

治療用CIK細胞通常來源于患者外周血單個核細胞，但是，外周血中殺傷細胞的數量有限，無法滿足治療過程中對于CIK細胞的大量需求，因此需要對CIK細胞進行體外擴增。

目前，最常使用CD3單克隆抗體、白細胞介素-1白細胞介素-2以及γ-干擾素等因子對PBMC細胞進行活化、擴增，存在著CIK細胞生長緩慢、增殖效果差以及對于腫瘤細胞的細胞毒性弱等問題。

發明內容

為了提高CIK細胞體外擴增的細胞增殖效果以及CIK細胞的細胞毒性，本申請提供一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法及其應用。

第一方面，本申請提供的一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法采用如下的技術方案：

一種高增殖能力和高細胞毒性CIK細胞的培養方法，使用CIK細胞培養基進行CIK細胞體外擴增，所述CIK細胞培養基包括基礎培養基和添加在基礎培養基中的第一組分和第二組分；

所述第一組分包括蒲公英甾醇、菊苣酸以及五味子醇；

所述第二組分可誘導PBMC細胞分化為CIK細胞。

優選的，所述第一組分中各物質在基礎培養基中的終濃度為：

蒲公英甾醇：1.0-2.5μg/mL；

菊苣酸：1.5-4.0μg/mL；

五味子醇：0.3-1.5μg/mL。

通過采用上述技術方案，在進行CIK細胞體外擴增的過程中添加蒲公英甾醇、菊苣酸以及五味子醇，可提高CIK細胞的增殖能力，進而提高了CIK細胞的體外擴增效果。

優選的，所述第二組分包括干擾素-γ、鼠抗人CD3單克隆抗體、重組人白細胞介素2、重組人白細胞介素1α以及植物血凝素。

優選的，所述基礎培養基獨立地選自1640培養基、GT-T551培養基以及RMPI-1640培養基中的一種。

優選的，所述CIK細胞培養基還包括添加在基礎培養基中的第三組分，所述第三組分還包括人參皂苷以及攬香烯。

優選的，所述第三組分中各物質在基礎培養基中的終濃度為：