[發(fā)明專利]一種與苦瓜全雌性相關(guān)的KASP分子標(biāo)記及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210305726.0
• 申請日: 2022-03-25
• 公開（公告）號: CN114427007A
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寧宇;劉靜;徐海;劉之洋;夏彭飛;陳龍正;袁希漢
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 李鑫

1.一種與苦瓜全雌性相關(guān)的KASP分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記位于苦瓜基因組1號染色體上的24645998位，在24645998位發(fā)生T向C的點(diǎn)突變；其中，用于擴(kuò)增所述分子標(biāo)記的KASP引物組包括正向引物F1、正向引物F2和反向引物R；其中，所述正向引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述正向引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.一種與苦瓜全雌性相關(guān)的KASP引物組，其特征在于，該引物組包括正向引物F1、正向引物F2和反向引物R；其中，所述正向引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述正向引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.一種用于鑒定苦瓜性型的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含權(quán)利要求2所述的KASP引物組。

4.權(quán)利要求1所述的KASP分子標(biāo)記、權(quán)利要求2所述的KASP引物或權(quán)利要求3所述的試劑盒在苦瓜性別的鑒定、苦瓜全雌株的篩選或者在育種中的應(yīng)用。

5.一種利用KASP分子標(biāo)記來鑒定苦瓜性別的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)以待測樣品基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述的KASP引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物；

(2)對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測與分析。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)為TouchdownPCR擴(kuò)增，其中，

PCR反應(yīng)體系總體積為10μL，包括2*KASP mastermix 5μL，PrimerMix 2.5μL，模板DNA(30ng/μL)2.5μL；

PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性10min；94℃變性20s；61℃～56℃退火延伸60s，共10個(gè)touchdown循環(huán)，每個(gè)循環(huán)退火延伸溫度降0.8℃；第二輪循環(huán)，94℃變性20s；55℃退火延伸60s，26個(gè)循環(huán)。

7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述檢測為對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行熒光檢測，其中，T/T為表現(xiàn)為全雌株基因型，T/C為表現(xiàn)為雌雄同株的雜合基因型；C/C為表現(xiàn)為純合的雌雄同株基因型。