[發明專利]一種與苦瓜全雌性相關的KASP分子標記及其應用

在審

• 申請號: 202210305726.0
• 申請日: 2022-03-25
• 公開（公告）號: CN114427007A
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 寧宇;劉靜;徐海;劉之洋;夏彭飛;陳龍正;袁希漢
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 李鑫

本發明公開了一種與苦瓜全雌性相關的KASP分子標記及其應用。該分子標記位于苦瓜基因組1號染色體上的24645998位，在24645998位發生T向C的點突變；其中，用于擴增所述分子標記的KASP引物組包括正向引物F1、正向引物F2和反向引物R；其中，所述正向引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述正向引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。該KASP分子標記可應用在苦瓜性別的鑒定、苦瓜全雌株的篩選或者在育種中，具有操作簡便、成本低廉、特異性強、穩定性高的特點。

技術領域

本發明屬于生物分子標記技術領域，尤其涉及一種與苦瓜全雌性相關的KASP分子標記及其應用。

背景技術

苦瓜(Momordica charantia L.)屬葫蘆科苦瓜屬，在我國是一種深受消費者喜愛的特色蔬菜作物。苦瓜富含維生素、苦瓜素、皂苷、多肽、生物堿、黃酮等物質，具有祛濕、降血糖、抗腫瘤及提高免疫力等多種藥用功效。

商品苦瓜由雌花的子房部位發育而成，因此，全雌株具有熟性早、產量高的優點，符合設施栽培對苦瓜品種的要求。此外，以全雌株為母本進行雜交制種時利用蜜蜂授粉代替人工去雄雜交，可有效降低制種成本，并且在理論上可使雜交率達到100％，提高制種質量。因此，全雌性在苦瓜新品種創制及配套的制種過程中具有巨大的應用價值和廣闊的應用前景。

利用分子標記輔助選擇手段對苦瓜全雌性進行早期篩選鑒定可大大提高育種選擇效率，加速育種進程。盡管目前已經有苦瓜全雌性相關分子標記的報道，但要么遺傳距離較遠，篩選準確率不高，要么操作復雜，難以滿足當前高通量快速育種的需求。KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR，競爭性等位基因特異性PCR)技術具有準確性高、位點適應性強、成本低、適合檢測大量樣本SNP位點等優勢，因此，開發與苦瓜全雌性緊密連鎖的KASP分子標記對于提高我國苦瓜全雌育種效率和育種水平具有重要意義。

發明內容

為了克服現有技術的缺點，本發明的首要目的在于提供一種與苦瓜全雌性相關的KASP分子標記。

本發明的再一目的在于提供上述與苦瓜全雌性相關的KASP分子標記的應用。

本發明是這樣實現的，一種與苦瓜全雌性相關的KASP分子標記，所述分子標記位于苦瓜基因組1號染色體上的24645998位，在24645998位發生T向C的點突變；該位置及上下游各200bp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

其中，用于擴增所述分子標記的KASP引物組包括正向引物F1、正向引物F2和反向引物R；所述正向引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述正向引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

所述正向引物F1為KASP24645998-F1及其5’端與熒光接頭序列連接構成，KASP24645998-F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所連接的熒光接頭為FAM熒光接頭，FAM熒光接頭的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述正向引物F2為KASP24645998-F2及其5’端與又一熒光接頭序列連接構成，KASP24645998-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所連接的熒光接頭為HEX熒光接頭，HEX熒光接頭的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；

所述反向引物R為KASP24645998-R，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本發明進一步公開了一種與苦瓜全雌性相關的KASP引物組，該引物組包括上述正向引物F1、正向引物F2和反向引物R；其中，所述正向引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述正向引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述反向引物R的核苷酸序列如SEQID NO:4所示。