[發(fā)明專利]聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針及其檢測(cè)試紙條與制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210304688.7
• 申請(qǐng)日: 2022-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN114942326A
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙肅清;潘俊康;陳澤楷;何綺怡;崔錫平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/82;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 廣州市科豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

本發(fā)明公開了一種聚多巴胺包裹的ZIF?8納米粒子?抗葉酸多克隆抗體探針及其檢測(cè)試紙條與制備方法；其技術(shù)方案包括聚多巴胺包裹ZIF?8的納米粒子，以及與所述聚多巴胺包裹ZIF?8的納米粒子偶聯(lián)的抗葉酸多克隆抗體；旨在提供一種在高鹽環(huán)境下穩(wěn)定不易聚沉，溫度和化學(xué)穩(wěn)定性均良好，同時(shí)納米粒子呈黑灰色狀，具有明顯的帶標(biāo)記的顏色探針；以及一種含聚多巴胺包裹的ZIF?8納米粒子?抗葉酸多克隆抗體探針的試紙條，該檢測(cè)試紙條特異性高，靈敏度好；屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，本發(fā)明還涉及含改探針的檢測(cè)試紙條，以及該檢測(cè)試紙條的制備方法。

背景技術(shù)

葉酸(FA)是人體在利用糖分和氨基酸時(shí)的必要物質(zhì)，是機(jī)體細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖所必需的物質(zhì)。葉酸在體內(nèi)葉酸以四氫葉酸的形式起作用，四氫葉酸在體內(nèi)參與嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和轉(zhuǎn)化。葉酸在制造核酸(核糖核酸、脫氧核糖核酸)上扮演重要的角色。葉酸幫助蛋白質(zhì)的代謝，并與維生素B12共同促進(jìn)紅細(xì)胞的生成和成熟，是制造紅血球不可缺少的物質(zhì)。葉酸對(duì)細(xì)胞的分裂生長(zhǎng)及核酸、氨基酸、蛋白質(zhì)的合成起著重要的作用。人體缺少葉酸可導(dǎo)致紅血球的異常，未成熟細(xì)胞的增加，貧血以及白血球減少。葉酸是胎兒生長(zhǎng)發(fā)育不可缺少的營(yíng)養(yǎng)素。孕婦缺乏葉酸有可能導(dǎo)致胎兒出生時(shí)出現(xiàn)低體重、唇腭裂、心臟缺陷等。如果在懷孕頭3個(gè)月內(nèi)缺乏葉酸，可引起胎兒神經(jīng)管發(fā)育缺陷，而導(dǎo)致畸形。因此，準(zhǔn)備懷孕的女性，可在懷孕前就開始每天服用100微克到300微克葉酸。常見的葉酸檢測(cè)方法有比色法、薄層層析法、高效液相色譜法、微生物法以及同位素放射免疫法。這些方法雖然各有優(yōu)點(diǎn)，但是應(yīng)用范圍受限，同時(shí)伴隨著儀器或是放射性等的缺點(diǎn)。因此開發(fā)一種快速靈敏的檢測(cè)方法用于葉酸的快速檢測(cè)是十分有意義的。

免疫層析試紙條是目前比較廣泛使用的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的檢測(cè)技術(shù)，較為成熟的免疫層析試紙條技術(shù)利用膠體金納米粒子標(biāo)記抗體用于捕獲目標(biāo)物從而達(dá)到檢測(cè)的目的。膠體金納米粒子合成方法簡(jiǎn)便，合成條件容易實(shí)現(xiàn)，且摩爾吸光系數(shù)高，因而是目前免疫層析方法中最廣泛使用的信號(hào)標(biāo)記物。但是膠體金在高鹽濃度下容易聚集，常常發(fā)生“死金”現(xiàn)象。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足之處，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種在高鹽環(huán)境下穩(wěn)定不易聚沉，溫度和化學(xué)穩(wěn)定性均良好，同時(shí)納米粒子呈黑灰色狀，具有明顯的帶標(biāo)記的顏色的探針。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針的試紙條，該檢測(cè)試紙條特異性高，靈敏度好。

為此，本發(fā)明提供的第一個(gè)技術(shù)方案是這樣的：

一種聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，包括聚多巴胺包裹ZIF-8的納米粒子(ZIF-8@PDA)，以及與所述聚多巴胺包裹ZIF-8的納米粒子偶聯(lián)的抗葉酸多克隆抗體。

進(jìn)一步的，上述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，所述的抗葉酸多克隆抗體按照以下的步驟制得的：

1)制備葉酸完全抗原

使用戊二醛法對(duì)葉酸上的氨基進(jìn)行活化，之后分別加入載體蛋白牛血清蛋白BSA和卵清白蛋白OVA進(jìn)行偶聯(lián)，分別得到免疫葉酸完全抗原FA-BSA和葉酸完全包被抗原FA-OVA；

2)將制備好的免疫葉酸完全抗原FA-BSA和葉酸完全包被抗原FA-OVA與免疫佐劑混合乳化；

3)將乳化后的混合物使用注射器在新西蘭大白兔的頸部和背部的皮下，經(jīng)過4-5個(gè)免疫周期后采取耳靜脈取血，獲得抗葉酸的多克隆抗體。

其中：葉酸半抗原，即為式(Ⅰ)所示化合物；

葉酸完全抗原，即式(Ⅱ)所示化合物；

載體蛋白