[發明專利]聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針及其檢測試紙條與制備方法

在審

• 申請號: 202210304688.7
• 申請日: 2022-03-26
• 公開（公告）號: CN114942326A
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 趙肅清;潘俊康;陳澤楷;何綺怡;崔錫平
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/82;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

1.一種聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，其特征在于，包括聚多巴胺包裹ZIF-8的納米粒子，以及與所述聚多巴胺包裹ZIF-8的納米粒子偶聯的抗葉酸多克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，其特征在于，所述的抗葉酸多克隆抗體按照以下的步驟制得的：

1)制備葉酸完全抗原

使用戊二醛法對葉酸上的氨基進行活化，之后分別加入載體蛋白牛血清蛋白BSA和卵清白蛋白OVA進行偶聯，分別得到免疫葉酸完全抗原FA-BSA和葉酸完全包被抗原FA-OVA；

2)將制備好的免疫葉酸完全抗原FA-BSA和葉酸完全包被抗原FA-OVA與免疫佐劑混合乳化；

3)將乳化后的混合物使用注射器在新西蘭大白兔的頸部和背部的皮下，經過4-5個免疫周期后采取耳靜脈取血，獲得抗葉酸的多克隆抗體。

3.根據權利要求1所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，其特征在于，所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子按照以下的步驟制得的：

步驟1：將六水合硝酸鋅Zn(NO₃)₂·6H₂O的甲醇溶液、2-甲基咪唑混合反應30分鐘后，離心取沉淀干燥得到ZIF-8納米粒子；

步驟2：將ZIF-8納米粒子、鹽酸聚多巴胺、pH8.5的Tris-HCl溶液、乙醇-水混合溶液混合攪拌反應24小時，離心取沉淀干燥得到聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子。

4.權利要求1所述的一種聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針的制備方法，其特征在于，將聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子的水溶液、堿溶液、含抗葉酸多克隆抗體的兔血清進行混合，反應1h，然后加入封閉液進行封閉，最后離心得到的沉淀物得到ZIF-8@PDA納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針。

5.根據權利要求4所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針的制備方法，其特征在于，所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子與抗葉酸多克隆抗體的質量比為100：(1-20)。

6.根據權利要求4所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針的制備方法，所述ZIF-8@PDA納米粒子的水溶液、堿溶液、含抗葉酸多克隆抗體的兔血清和所述封閉液的體積比為1000：(0-8)：(1-20)：100。

7.根據權利要求4所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針的制備方法，其特征在于，所述ZIF-8@PDA納米粒子的水溶液濃度為0.625～10mg/mL，所述堿溶液為0.2M碳酸鉀溶液，所述含抗葉酸多克隆抗體的兔血清中抗葉酸多克隆抗體的濃度為50mg/mL，所述封閉液為0.1mg/mL牛血清蛋白溶液。

8.權利要求1所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針在制備檢測葉酸的免疫層析試紙條中的應用。

9.一種檢測葉酸的免疫層析試紙條，其特征在于，由樣品墊、硝酸纖維素膜、結合墊和吸水墊依次貼合在底板上組成；

所述結合墊上包被有權利要求1所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針，所述硝酸纖維素膜上依次劃有葉酸包被抗原FA-OVA的檢測線和羊抗兔IgG抗體的質控線。

10.根據權利要求9所述的葉酸快速檢測試紙條，其特征在于，所述的聚多巴胺包裹的ZIF-8納米粒子-抗葉酸多克隆抗體探針的濃度為5-30mg/mL，噴涂量為7.5-10.0μL/cm；所述包被抗原FA-OVA的濃度為5-10mg/mL，噴涂量為1μL/cm；所述羊抗兔IgG抗體的濃度為0.1-1.0mg/mL，噴涂量為1μL/cm；所述質控線與檢測線的間距為5mm。